發(fā)布時(shí)間：2020-12-16 07:08

　　Mg2+是植物細(xì)胞中含量最豐富的二價(jià)陽離子,也是生物體生長(zhǎng)發(fā)育過程中不可或缺的礦物質(zhì)素。植物體內(nèi)存在一類Mg2+轉(zhuǎn)運(yùn)體,能夠應(yīng)答鎂脅迫,在植物細(xì)胞中調(diào)控Mg2+的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)以及維持細(xì)胞內(nèi)Mg2+平衡方面發(fā)揮重要作用。1、通過TMHMM在線網(wǎng)頁對(duì)AtZntB4（At2g04305）的蛋白質(zhì)序列進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)其C端有兩個(gè)跨膜區(qū),預(yù)測(cè)該基因可能編碼一個(gè)與跨膜相關(guān)的蛋白。通過檢測(cè)不同濃度和不同時(shí)間鎂脅迫處理的擬南芥幼苗的根部和冠部該基因的表達(dá)情況,可知AtZntB4的表達(dá)與Mg2+相關(guān)。2、通過將AtZntB4導(dǎo)入缺乏Zn2+轉(zhuǎn)運(yùn)體的釀酒酵母突變體ZHY3中進(jìn)行Zn2+轉(zhuǎn)運(yùn)能力檢測(cè),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明AtZntB4和Zn2+轉(zhuǎn)運(yùn)無關(guān)。進(jìn)一步利用鼠傷寒沙門氏桿菌突變株MM281來驗(yàn)證了其是否具有Mg2+轉(zhuǎn)運(yùn)能力,實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明AtZntB4能夠互補(bǔ)MM281的Mg2+轉(zhuǎn)運(yùn)缺陷。3、用缺乏不同二價(jià)金屬陽離子（Ca2+、Fe2+、Zn2+、Mn2+、Mg2+）條件對(duì)atzntb4突變體和野生型擬南芥進(jìn)行處理,結(jié)果顯示,在缺乏Ca2+和Mg2+條件下,atzntb4突變體長(zhǎng)勢(shì)相較于野生型較弱,但在缺Mg2+條... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－ｌ／ｌ／Ｚ／＂似基因克隆及菌液ＰＣＲ鑒定結(jié)果（Ｍ：?ＤＬ２０００；箭頭所指為目的條帶；ａ：??基因克隆結(jié)果；ｂ：?ＡＺ價(jià)基因菌液ＰＣＲ鑒定結(jié)果）??－

菌中的ＣｏｒＡ蛋白結(jié)構(gòu)，都有兩個(gè)跨膜區(qū)，在第一個(gè)跨膜區(qū)上存在轉(zhuǎn)運(yùn)Ｍｇ２＋所必須的??ＧＭＮ保守基序。??如圖２－２所示：基因序列預(yù)測(cè)跨膜區(qū)分析。通過對(duì)／＾２？劇的基因序列分??析，我們發(fā)現(xiàn)，Ａ辦必／基因開放閱讀讀碼框含有１３０５個(gè)堿基對(duì)，編碼４３４個(gè)氨基酸；??通過ＴＭＨＭＭ在線分析，在ＡｔＺｎｔＢ４的Ｃ端有兩個(gè)跨膜區(qū)，已知ＣｏｒＡ家族中的Ｍｇ２＋??轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的一個(gè)重要區(qū)域是Ｃ端的兩個(gè)跨膜區(qū)，所以可以預(yù)測(cè)出該蛋白與Ｍｇ２＋可能具??有相關(guān)性。??ＴＭＨＭＭ?ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ?ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｉｅｓ?ｆｏｒ?ＷＥＢＳＥＱＵＥＮＣＥ??ｉ?：）?ＩＴ??■?■??０Ｌ＿＿＿＿＿＿，．．．．．．ｍＭ??５０?１００?１５０?２００?２５０?３００?３５０?４００??ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ??ｉｎｓｉｄｅ??ｏｕｔｓｉｄｅ??圖２－２?基因序列預(yù)測(cè)跨膜區(qū)分析??Ｆｉｇ．?２－２?Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏ＼ＡｔＺｎｔＲ４?ｇｅｎｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｉｎ?ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ?ｒｅｇｉｏｎ??２．３本章小結(jié)??根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)擬南芥Ｍｇ２＋轉(zhuǎn)運(yùn)家族－ＣｏｒＡ家族成員的蛋白結(jié)構(gòu)分析，Ｃ端均存??在兩個(gè)疏水的跨膜區(qū)。本研究中通過克隆得到Ｊ／Ｚ咐５４基因，對(duì)其基因序列進(jìn)行分析發(fā)??現(xiàn)，在Ｃ端也有兩個(gè)跨膜區(qū)，第一個(gè)跨膜區(qū)由第３３１－３５３之間的氨基酸序列組成，第二??個(gè)跨膜區(qū)由第３７３－３９５之間的氨基酸序列饑成。所以從序列結(jié)構(gòu)上分析我們推測(cè)??可能編碼一個(gè)和跨膜相關(guān)的蛋白。對(duì)于推測(cè)的合理性

基因表達(dá)量的變化直觀判斷出在缺鎂和高鎂處理下該基因在根部和冠部誘導(dǎo)不??同時(shí)間后轉(zhuǎn)錄活性情況。??如圖３－１所示，不同時(shí)間缺鎂和高鎂誘導(dǎo)下基因在擬南芥冠部和根中表達(dá)??模式。以２．５?ｍＭ處理２４?ｈ作為對(duì)照，發(fā)現(xiàn)在缺鎂和高鎂誘導(dǎo)下基因在冠中的??轉(zhuǎn)錄活性下降。缺鎂誘導(dǎo)８?ｈ后在冠中的表達(dá)量降到最低值，僅為對(duì)照的０．１１８；??誘導(dǎo)２４ｈ后，在培養(yǎng)基中加２．５ｍＭＭｇ２＋誘導(dǎo)２４ｈ，及／的表達(dá)量又回到近乎正常??水平；高鎂誘導(dǎo)２?ｈ和８?ｈＡＺｎ／似在冠中的表達(dá)量均較低，分別為對(duì)照的０．５１７６和０．４９２５。??缺鎂和高鎂誘導(dǎo)下基因在根中的轉(zhuǎn)錄活性提高。缺鎂誘導(dǎo)２４?ｈ后在根??－１９－??


本文編號(hào)：2919751