致病弧菌是可引起人和水生生物共患病的一類病原性弧菌。弧菌的防治一般采用抗生素或化學(xué)制劑等,但隨著耐藥性菌株的出現(xiàn),防控變得十分棘手,由此,噬菌體的應(yīng)用重新出現(xiàn)在大眾視野。本研究意在篩選對(duì)多種致病性弧菌具有高效裂解性的寬譜噬菌體,并應(yīng)用此類噬菌體制備成新型生物抑菌劑,來(lái)控制水產(chǎn)品養(yǎng)殖和加工過(guò)程中致病性弧菌的繁殖和污染。（1）從海魚、淡水魚、貝類宰殺污血水樣品中分離純化得到27株弧菌噬菌體,6株弧菌噬菌體透射電鏡下形態(tài)分別為短尾噬菌體科和肌尾噬菌體科兩類。經(jīng)裂解譜測(cè)定,得噬菌體VppYZU-Y1和噬菌體OY-1裂解譜最寬,在pH5.0～12.0條件下噬菌體的穩(wěn)定性較好,屬于耐堿不耐酸型;50℃～80℃條件下噬菌體活性逐步降低。對(duì)噬菌體進(jìn)行最佳感染復(fù)數(shù)、一步生長(zhǎng)曲線的測(cè)定,挑選得到出穩(wěn)定性好,裂解能力強(qiáng)的噬菌體。（2）采用全基因組測(cè)序的方法測(cè)定噬菌體的基因信息。噬菌體OY-1的全基因組信息未找到同源噬菌體,判斷該噬菌體為新噬菌體。噬菌體OY-1的基因組全長(zhǎng)為43479 bp,其中編碼基因總長(zhǎng)度分別為38403 bp,平均長(zhǎng)度分別為936.66 bp,占總長(zhǎng)的88.33%,GC含量為49.26... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：92 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１弧菌噬菌體透射電鏡照片??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｇｒａｐｈ?ｏｆ?Ｖｉｂｒｉｏ?ｐｈａｇｅｓ??

?２．３．４嗤菌體的ｐＨ穩(wěn)定性??噬菌體ｐＨ穩(wěn)定性結(jié)果如圖２－２所示，在ｐＨ?５．０？９．０范圍內(nèi)，噬菌體效價(jià)較高，其裂??解活性均較為穩(wěn)定和良好。噬菌體侵染宿主首先需要吸附，吸附作用受ｐＨ等條件影響，??進(jìn)而影響到噬菌體對(duì)宿主的侵染［８４］；當(dāng)ｐＨ值降低或升高時(shí)，噬菌體的裂解活性有所降低。??噬菌體ＯＹ－１、ＶｐｐＹＺＵ－Ｙ?１在ｐＨ＞１０．０的條件下仍保持較高的存活率（５４．９５％以上），具??有嗜堿特性；噬菌體〇丫－１在？只３．０幾乎完全失活，屬于耐堿不耐酸型；￥＾＾２１１－￥１在??酸性條件下，活性顯著下降，但在堿性條件下穩(wěn)定性較好，屬于畏酸嗜堿型。??９?５?ｒ?－Ｂ－ｏｖ．，?Ａ?＿＿－ＶＰＰＹＺＵ－Ｙｌ?Ｂ??工?１０?＿?＿ｚ??Ｉ９－０－?／一！８＿?／??＾８－ｓ■?／?筆?４．??Ｉ?１?ｈ．?Ｉ??１?／?／■??２?４?６?８?１０?１２?２?４?６?８?１０?１２??ｐＨ?ｐＨ??圖２－２弧菌噬菌體的ｐＨ穩(wěn)定性??Ｆｉｇ．?２－２?ｐＨ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?Ｖｉｂｒｉｏ?ｐｈａｇｅｓ??注：Ａ為最小弧菌噬菌體ＯＹ－１；?Ｂ為副溶血性弧菌噬菌體ＶｐｐＹＺＵ－Ｙｌ??２．３．５?Ｐｆｅ國(guó)體的熱穩(wěn)定性??噬菌體熱穩(wěn)定性結(jié)果如圖２－３所示，噬菌體ＯＹ－１經(jīng)５０°Ｃ處理６０?ｍｉｎ后活性均基本沒(méi)??有變化；在６０°Ｃ下作用６０?ｍｉｎ后

?ｉｔ??ｆ?—ｔ體純化帶??■ｄａ??圖３－１噬菌體純化結(jié)果??Ｆｉｇ．?３－１?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｐｈａｇｅ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ??３．３．２噬菌體ＤＮＡ樣品檢測(cè)??如圖３－２所示，為噬菌體ＯＹ－１ＤＮＡ瓊脂糖凝膠電泳圖，電泳條帶清晰完整，表示無(wú)??污染無(wú)降解，可以繼續(xù)后續(xù)測(cè)第三代全基因組實(shí)驗(yàn)的要求。??Ｉ??圖３－２噬菌體核酸鑒定??Ｆｉｇ．?３－２?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｇｅｎｏｍｅ?ｏｆ?ｐｈａｇｅｓ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ；泳道?１：?ＯＹ－１；??３．３．３噬菌體基因組概述??最小弧菌噬菌體ＯＹ－１基因組全長(zhǎng)為４３４７９?ｂｐ，編碼基因總長(zhǎng)度分別為３８４０３?ｂｐ，平??均長(zhǎng)度為９３６．６６?ｂｐ，占總長(zhǎng)的８８．３３％，ＧＣ含量為４９．２６％，有４１個(gè)開放閱讀框（ＯＲＦｓ）。??４１個(gè)ＯＲＦｓ編碼蛋白中都可以在數(shù)據(jù)庫(kù)中搜到同源性基因序列，其中２４個(gè)ＯＲＦｓ編碼的??蛋白為假設(shè)蛋白，有１７個(gè)蛋白序列功能明確，基因組數(shù)據(jù)顯示最小弧菌噬菌體ＯＹ－１為一??種新的噬菌體�；蚪M數(shù)據(jù)顯示最小弧菌噬菌體ＯＹ－１為一種新的噬菌體？，分析表明最小??弧菌噬菌

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]建立泉州市水產(chǎn)品質(zhì)量安全可追溯體系的初步研究[D]. 吳瓊.集美大學(xué) 2014
[3]噬菌體對(duì)食品中腸炎沙門氏菌污染的生物防控研究[D]. 張鵬禹.南京師范大學(xué) 2014



本文編號(hào)：2914282