蟬花是一種歷史悠久的藥食用真菌,含有多糖、蟲草酸、核苷類、甾醇類以及多肽類等生物活性物質(zhì)。隨著自然環(huán)境的變化,天然蟬花資源稀缺,因此通過人工進(jìn)行蟬花培育成為科研工作的一個熱點。本文從分析蟬花子實體的微生物群落結(jié)構(gòu)入手,找出其中的關(guān)鍵菌株,再對關(guān)鍵菌株進(jìn)行分離以選育出發(fā)酵性狀優(yōu)良的菌株,進(jìn)而開展純種的發(fā)酵培養(yǎng)研究,通過添加蠶蛹粉的發(fā)酵模擬培養(yǎng)出與子實體成分接近的蟲菌復(fù)合物。論文的主要工作如下:(1)采用高通量測序技術(shù),分析了不同產(chǎn)地、不同部位以及不同發(fā)育階段的野生蟬花子實體的微生物群落結(jié)構(gòu)。Isaria cicadae在不同產(chǎn)地的蟬花子實體真菌群落中處于優(yōu)勢地位,其中OTU6782為優(yōu)勢OTU,而蟬花細(xì)菌群落的結(jié)構(gòu)由于產(chǎn)地不同而發(fā)生明顯變化。Isaria cicadae在蟬花子實體不同部位(表面泥土、孢梗束、菌皮、帶泥菌皮以及菌核)的真菌群落中均處于優(yōu)勢地位,其中OTU6782相對豐度最高。在蟬花子實體發(fā)育過程中,Isaria cicadae迅速占據(jù)真菌群落優(yōu)勢地位,且該物種具有豐富的種內(nèi)多樣性,其中OTU6782為優(yōu)勢OTU,此外OTU12109,OTU13152,OTU486,OTU2297,OTU11491,OTU246,OTU58,OTU2950,OTU8787,OTU73,OTU130等細(xì)菌與Isaria cicadae在蟬花發(fā)育過程中共同存在。(2)從蟬花子實體中分離了Isaria cicadae 8196、82542、81957和TZC-3菌株,對其進(jìn)行了ITS和18S rRNA基因序列分析,并通過液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)篩選出發(fā)酵性能較為優(yōu)良的菌株。分子學(xué)及形態(tài)學(xué)鑒定表明,8196、82542、81957和TZC-3菌株的ITS rRNA基因序列與Isaria cicadae相似性在99%以上,與野生蟬花真菌OTU6782序列相似性最高達(dá)到99.65%。對4株菌分別進(jìn)行液態(tài)培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)不同菌株在生物量、胞內(nèi)外多糖含量、胞內(nèi)外核苷含量存在一定的差異,其中TZC-3菌株在生物量、胞內(nèi)多糖總量以及腺苷的產(chǎn)量和產(chǎn)率上都呈現(xiàn)明顯的優(yōu)勢,因而選擇該菌株用于后續(xù)實驗研究。(3)考察了蟬蛹粉對Isaria cicadae TZC-3發(fā)酵過程的影響,分析了蟬蛹粉強化發(fā)酵蟬花菌絲體的成分組成。結(jié)果表明,蟬蛹粉的添加可在一定程度上促進(jìn)蟬花菌絲體中胞內(nèi)多糖、腺苷和N6-(2-羥乙基)-腺苷(HEA)的合成,其中添加4%蟬蛹粉發(fā)酵的強化菌絲體質(zhì)量較高,胞內(nèi)多糖產(chǎn)率為14.55 mg/g,胞內(nèi)多糖產(chǎn)量為74.78 mg/100 mL;腺苷產(chǎn)率為1.22 mg/g,產(chǎn)量為6.66 mg/100 mL;HEA產(chǎn)率為1.58 mg/g,產(chǎn)量為8.63mg/100 mL。與對照組菌絲體和蟬蛹粉相比,強化菌絲體的成分(一般成分、水解氨基酸、游離氨基酸、水解單糖、脂肪酸)與野生蟬花子實體更加接近,其中部分游離氨基酸(天冬氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸和脯氨酸)和水解后的單糖(阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和木糖)含量提高最為明顯。
【學(xué)位單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：Q93-33;S567.39
【部分圖文】：

蟬花、蟬茸、蟲花、蟬草和胡蟬，是與冬蟲夏草、蛹蟲草相提并論的另 400 多種[1]，但具有較高藥用價值且其中，中醫(yī)認(rèn)為蟬花味甘、性寒，效與冬蟲夏草和蛹蟲草近似的優(yōu)質(zhì)江以南，包括四川、江蘇、浙江、福、南韓等地區(qū)也有分布[2]。一般來說大，有竹蟬活動，枯枝落葉層比較厚體長度 15-80 mm 左右，主要由蟲體3.5 cm，直徑 1-1.4 cm，形狀與蟬若mm，是最外層乳白色包裹蟲體的結(jié)“菌核”是真菌利用蟬的營養(yǎng)物質(zhì)生長，呈長條形或棒狀，新鮮時白色，白色或淡黃色的花粉，即為蟬花孢蛹蟲草更容易獲得，并且蟬花的形境的代表產(chǎn)物。

第一章 緒論蟬若蟲上，逐漸生長出芽管并同時分泌幾丁質(zhì)酶，從而穿過蟬蛹堅硬的外殼進(jìn)入到內(nèi)部，侵入的部分菌絲通過出芽的方式增生，并且產(chǎn)生豐富的代謝物質(zhì)使蟲體致死，蟲體的營養(yǎng)物質(zhì)生長逐漸被菌絲利用侵染逐漸成為菌核，最終形成蟬花蟲菌復(fù)合體，成熟的蟬花產(chǎn)生孢子進(jìn)一步侵染更多的蟬蛹[4-6]（圖 1-2）。對于蟬花生長過程和侵染機制的研究為后來研究蟲生真菌與寄主之間的相互關(guān)系、蟬花的形成機制和過程及通過模擬自然生長條件人工培育蟬花奠定了基礎(chǔ)。

其中腺苷（圖1-3A）、N6-(2-羥乙基)-腺苷（圖 1-3B）由于具有良好的藥用價值和滋補作用成為人們關(guān)注的熱點，同時也是蟲草類制品的質(zhì)量控制指標(biāo)。在蟬花核苷的研究中，Wang 等[40]通過在蠶蛹上固態(tài)培養(yǎng)出蟬花子實體并測定了其中腺苷和蟲草素的含量，結(jié)果表明其中腺苷和蟲草素含量分別為 1421.45 μg/g 和 1398.12 μg/g；Olatunji 等[14]評價了來自蟬擬青霉的腺苷對谷氨酸誘導(dǎo)的 PC12 細(xì)胞中的氧化應(yīng)激的保護作用，結(jié)果顯示腺苷增加 GSH-Px和 SOD 的活性，保留線粒體膜電位（MMP），增加 Bcl-2/Bax 比率，并降低 ERK，p38和 JNK 的表達(dá)
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本文編號：2882516