蕙蘭(Cymbidium faberi)是蘭科植物中地生蘭的一種,廣泛分布于中國、韓國、日本等地區(qū)。在中國主要分布于陜南地區(qū)、云貴高原和長江中下游地區(qū)。蕙蘭是我國栽培歷史悠久的四大國蘭之一,因其植株高大,花型健美,花香四溢,擁有高雅的象征寓意而受到人們的追捧。近年來,由于人為的過度采挖,導致野生資源日漸枯竭,加之該物種種子細小不易萌發(fā),本身繁殖速度慢,生長周期長,野生資源的保護迫在眉睫;同時蕙蘭兼具觀賞和藥用價值,具有深入開發(fā)利用的潛力。本研究對陜南地區(qū)3個樣地(陜西省略陽縣、南鄭區(qū)和洋縣)的野生蕙蘭根部內生真菌進行分離,利用高通量測序技術和純培養(yǎng)方法進行蕙蘭內生真菌多樣性分析;對內生真菌的吲哚乙酸(IAA)活性、鐵載體活性等促生潛力進行研究,篩選出5株(NZ5、LY65、LG37、NZ80和LG19)具有促生能力的內生真菌菌株進行蕙蘭盆栽試驗;通過向不同試驗組中添加促生內生真菌,并測定蕙蘭的生物量和生理指標,來研究蕙蘭促生內生真菌對蕙蘭的促生作用。以期為開發(fā)利用蕙蘭內生真菌資源和促進蕙蘭生長發(fā)育提供基礎。試驗主要結論如下:1.從3個采樣地中共獲得211 517條有效序列,分為986個OTUs,包括8個真菌門,113個屬。Basidiomycota為優(yōu)勢門,Guehomyces為優(yōu)勢屬。不同地點的樣品內生真菌群落組成不同但有相似性,洋縣蕙蘭多樣性最豐富,略陽與南鄭之間相對而言相似度更高。實驗中僅檢測出Thanatephorus、Ceratobasidiaceae和Russulaceae三種菌根真菌,但豐度較低(0.1%),這表明菌根真菌在蕙蘭內生真菌群落中所占比例較低。2.在3個樣地中共分離出內生真菌216株,46個屬,木霉屬Trichoderma為優(yōu)勢屬分離率和分離頻率分別為18.52%、23.15%。其中略陽樣地分離出90株26個屬,8個獨有屬;南鄭65株21個屬,5個獨有屬;洋縣61株21個屬,7個獨有屬。多樣性分析結果顯示,略陽樣地分離的內生真菌多樣性指數(shù)、均勻度指數(shù)和豐富度指數(shù)最高,略陽與洋縣的內生真菌群落結構相似,這一結果與高通量測序結果并不相同。實驗中分離的內生真菌中包含角擔菌屬Ceratobasidium和亡革菌屬Thanatephorus兩個屬的菌根真菌,表明陜南蕙蘭偏好與角擔菌屬或亡革菌屬菌根真菌共生。3.對蕙蘭內生真菌的IAA活性等促生能力進行研究,篩選出促生內生真菌NZ5(Trichoderma sp.)、LY65(Trichoderma sp.)、LG37(Hypocrea sp.)、NZ80(Mucor sp.)和LG19(Nectriopsis sp.),對5株真菌進行培養(yǎng),并向蕙蘭中添加促生內生真菌。實驗測定結果表明,與對照組相比,通過添加促生內生真菌,蕙蘭的生物量及生理指標均有顯著性增加或降低,綜合實驗結果分析,T1(NZ5)處理對蕙蘭的促生作用最顯著。通過所篩選的促生內生真菌對蕙蘭幼苗的促生試驗,研究蕙蘭促生內生真菌對蕙蘭幼苗生長發(fā)育的影響,以期促進蕙蘭的生長發(fā)育,對蕙蘭野生資源的保護提供參考。
【學位單位】：陜西理工大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S682.31;Q93
【部分圖文】：

陜南地區(qū)包括秦嶺山地、漢江河谷盆地及大巴山山地 3 個伏明顯[43]。A 為洋縣，地處漢江河谷盆地邊緣，屬漢江流域。秦嶺山地腹地，屬嘉陵江流域。C 為南鄭區(qū)地處大巴山山地北該區(qū)域地處暖溫帶和北亞熱帶過渡區(qū)，是中國南北氣候、生物生態(tài)系統(tǒng)復雜，生物多樣性豐富，適宜野生蕙蘭的生長，是我分布地區(qū)之一。因此研究陜南地區(qū)野生蕙蘭內生真菌多樣性及蘭生長發(fā)育的影響，對促進蕙蘭的生長發(fā)育及其資源開發(fā)具有

圖 2-1 各采樣地樣品間 OTU 數(shù)量關系韋恩圖Fig.2-1 Venn plot among all samples真菌群落組成r 做分析，隨機抽取測序樣品中的有效序列，以equences)為橫坐標，以 OTUs 數(shù)目 (Observed O通過稀釋曲線不僅可以判斷樣品量是否充分，還種豐富度進行預測。如圖 2-2 所示，隨著測序數(shù)于平坦，說明測序結果基本覆蓋了樣品中絕大多續(xù)分析。結果表明，抽樣 reads 在 20 000 以下時增加，在 20 000-40 000 之間緩慢增加，超過 4達到飽和，增加測序數(shù)據無法再找到更多的 O

圖 2-2 內生真菌的稀釋曲線Fig. 2-2 The dilution curve of endophytic fungi總體樣本內生真菌群落結構分析用 RDP classifier 分類器對 OTUs 依次進行門(Phylum)、綱(Class)、、科(Family)及屬(Genus)水平上的物種分類注釋。結合 3 個樣本的 O果進行總體分析，采用 GraPhlAn 方法繪制蕙蘭內生真菌的群落組成和樹，如圖2-3所示為豐度前100的物種進化分類樹，將豐度前22個物種出) 所對應的門按不同的顏色標出, 圈和星號的大小代表豐度大小, 外中顏色深淺隨物種豐度變化。此可見, 蕙蘭的內生真菌蕙蘭的內生真菌中 Basidiomycota 為優(yōu)勢門lomycetes 為優(yōu)勢綱，Cystobasidiales 為優(yōu)勢目，Cystofilobasidiaceae 為Guehomyces 為優(yōu)勢屬(用字母 R 表示)。
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