硒是人體必需的微量元素之一,適當?shù)奈a充對人體健康具有積極作用。亞硒酸鈉等無機態(tài)硒補充劑是目前常見的硒補充劑,但它們的生物利用率較低,毒副作用較大,應用的局限性是顯而易見的。因此,通過生物轉(zhuǎn)化的方式,將無機態(tài)硒轉(zhuǎn)變成有機態(tài)硒,是硒補充劑研制的有效途徑。本研究在課題組前期研究的基礎上,以亞硒酸鈉為硒源,利用大豆對硒進行富集和轉(zhuǎn)化,制得富硒大豆蛋白,然后再采用蛋白酶對富硒大豆蛋白進行酶解,制備富硒大豆肽(Selenium-enriched Soybean Peptide,SSP)并對SSP的組成結(jié)構(gòu)進行了初步表征,對SSP的急性毒性及體內(nèi)外抗氧化能力進行評價。本論文的主要研究結(jié)果與結(jié)論如下:1.富硒大豆蛋白酶解液的最佳脫鹽條件:樣品pH=3、溫度為25℃、樹脂與樣品體積比等于0.2、吸附時間為2h、洗脫溶劑為50%乙醇,此條件下SSP得率為73.78%,脫鹽率為94.51%,可制得總硒含量為40.75mg/kg的SSP。2.各種表征手段顯示,SSP以酸性氨基酸為主,相對分子質(zhì)量主要在612Da-1422Da之間;SSP經(jīng)過酶解失去了大分子蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu),而二級結(jié)構(gòu)相對較完整,以α-螺旋為...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 氧化對機體的意義與危害
    1.2 抗氧化劑
    1.3 硒抗氧化作用的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 硒的概述
        1.3.2 硒補充劑抗氧化研究現(xiàn)狀
    1.4 硒對機體的其他作用
    1.5 硒的毒性
    1.6 研究意義
    1.7 研究內(nèi)容
        1.7.1 SSP的制備
        1.7.2 SSP的理化性質(zhì)與結(jié)構(gòu)
        1.7.3 SSP對小鼠的急性毒性評價與硒的代謝分布
        1.7.4 SSP體外清除自由基的能力及對HepG2細胞的作用
        1.7.5 SSP對 HFD致大鼠肝損傷的氧化保護作用
第二章 SSP的制備與結(jié)構(gòu)
    2.1 前言
    2.2 實驗材料與設備
        2.2.1 實驗原料
        2.2.2 實驗試劑
        2.2.3 實驗儀器
    2.3 試劑的配制
    2.4 實驗方法
        2.4.1 富硒大豆蛋白的制備
            2.4.1.1 大豆富硒
            2.4.1.2 富硒大豆蛋白的提取
        2.4.2 富硒大豆蛋白粉脫脂
        2.4.3 SSP的制備
        2.4.4 SSP脫鹽
            2.4.4.1 大孔吸附樹脂預處理
            2.4.4.2 DA201-C大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附動力試驗
            2.4.4.3 解吸劑濃度的選擇
            2.4.4.4 樹脂用量對吸附效果和脫鹽率的影響
            2.4.4.5 pH對吸附效果和脫鹽率的影響
            2.4.4.6 溫度對吸附效果和脫鹽率的影響
            2.4.4.7 肽得率的測定方法
        2.4.5 基本成分測定
        2.4.6 G-25凝膠層析分離SSP
        2.4.7 性質(zhì)與結(jié)構(gòu)分析
            2.4.7.1 掃描電鏡分析
            2.4.7.2 傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)分析
            2.4.7.3 熱重分析(TG)-差示掃描量熱分析(DSC)
        2.4.8 數(shù)據(jù)處理
    2.5 結(jié)果與討論
        2.5.1 富硒大豆蛋白與非富硒大豆蛋白的組分含量比較
        2.5.2 富硒大豆蛋白脫脂效果
        2.5.3 水解度
        2.5.4 SSP靜態(tài)脫鹽
            2.5.4.1 靜態(tài)吸附時間趨勢
            2.5.4.2 解吸劑溶度的確定
            2.5.4.3 不同樹脂與樣品體積比對吸附效果和脫鹽率的影響
            2.5.4.4 樣品pH對吸附效果和脫鹽率的影響
            2.5.4.5 樣品溫度對吸附效果和脫鹽率的影響
        2.5.5 氨基酸分析
        2.5.6 相對分子質(zhì)量分布情況
        2.5.7 掃描電鏡分析
        2.5.8 FT-IR分析
        2.5.9 TG-DSC同步熱分析
    2.6 本章小結(jié)
第三章 SSP對小鼠的急性毒性評價與硒的代謝分布
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 SSP水溶液
        3.2.2 實驗動物
    3.3 實驗方法
        3.3.1 給藥與觀察
        3.3.2 指標樣品的收集
        3.3.3 數(shù)據(jù)處理
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 一般情況觀察
        3.4.2 小鼠的攝食量變化和體重變化
        3.4.3 SSP對小鼠臟器系數(shù)的影響
        3.4.4 小鼠糞便硒含量變化情況
        3.4.5 小鼠臟器的硒含量分布情況
    3.5 實驗討論
    3.6 本章小結(jié)
第四章 SSP的體外抗氧化作用
    4.1 前言
    4.2 實驗材料與設備
        4.2.1 實驗原料
        4.2.2 實驗試劑
        4.2.3 實驗儀器
    4.3 試劑的配制
    4.4 實驗方法
        4.4.1 DPPH清除率的測定
        4.4.2 水楊酸法測定羥自由基清除率
        4.4.3 FRAP法測定樣品總抗氧化能力
        4.4.4 HepG2細胞培養(yǎng)、傳代
        4.4.5 SSP對HepG2細胞的毒性實驗
        4.4.6 SSP影響正常HepG2細胞生長的活力測定
        4.4.7 HepG2細胞氧化損傷模型的建立
        4.4.8 細胞形態(tài)觀察
        4.4.9 SSP影響氧化損傷HepG2細胞活力的測定
            4.4.9.1 SSP修復HepG2細胞氧化損傷
            4.4.9.2 SSP預防HepG2細胞氧化損傷
        4.4.10 CAT活力測定
        4.4.11 數(shù)據(jù)處理
    4.5 結(jié)果與討論
        4.5.1 SSP對 DPPH的清除率
        4.5.2 SSP對羥自由基的清除率
        4.5.3 SSP的亞鐵還原能力
        4.5.4 SSP對HepG2細胞增殖的影響
        4.5.5 HepG2細胞氧化損傷模型的建立
        4.5.6 SSP對氧化損傷HepG2細胞的形態(tài)的影響
        4.5.7 SSP對氧化損傷HepG2細胞存活率的影響
        4.5.8 SSP對氧化損傷HepG2細胞的CAT的影響
    4.6 本章小結(jié)
第五章 SSP對高脂飲食致大鼠肝損傷的氧化保護作用
    5.1 前言
    5.2 實驗材料與設備
        5.2.1 實驗樣品
        5.2.2 實驗動物
        5.2.3 主要試劑和儀器
    5.3 實驗方法
        5.3.1 實驗動物分組與給藥
        5.3.2 觀察指標與測定方法
        5.3.3 數(shù)據(jù)處理
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 體重變化
        5.4.2 肝臟抗氧化指標
        5.4.3 肝臟炎癥因子、血脂四項
        5.4.4 肝臟組織病理改變
    5.5 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 全文總結(jié)
    6.2 研究展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文



本文編號：3846140