為了提高畜牧業(yè)生產(chǎn)水平,獸藥作為畜牧業(yè)的基礎(chǔ)物質(zhì),被大量的使用,同時(shí)也對(duì)人們的身體造成了巨大的危害。因此獸藥殘留問題已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。獸藥殘留檢測目前最常用的方法是免疫分析法,對(duì)于免疫分析法來說最具關(guān)鍵的就是抗體,抗體的穩(wěn)定性對(duì)最終結(jié)果起著關(guān)鍵的作用,本論文利用基因工程技術(shù)成功獲得了氨芐青霉素的單鏈抗體,并在此基礎(chǔ)上建立了間接競爭ELISA檢測方法,為氨芐青霉素殘留檢測提供一種經(jīng)濟(jì)、靈敏、快速的檢測方法。從氨芐青霉素抗體的雜交瘤細(xì)胞中提取總RNA,利用RT-PCR反轉(zhuǎn)錄技術(shù)合成第一鏈cDNA。以針對(duì)鼠源重鏈可變區(qū)(V_H)及輕鏈可變區(qū)(V_L)基因的特異性引物,擴(kuò)增獲得V_H基因和V_L基因片段,通過擴(kuò)增后,得到V_H基因片段大小為340 bp左右,擴(kuò)增的V_L基因片段大小為320 bp,采用重疊延伸PCR(SOE-PCR)的方法,用柔性多肽Linker接頭(Gly4Ser)₃將V_H基因和V_L基因拼接成...

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 前言
    1.1 氨芐青霉素簡介
    1.2 氨芐青霉素殘留現(xiàn)狀及危害
    1.3 氨芐青青霉素的檢測方法
    1.4 單鏈抗體的制備及應(yīng)用
    1.5 酶聯(lián)免疫吸附法
    1.6 研究目的及意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
    2.2 方法
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 單鏈抗體的制備
    3.2 間接競爭ELISA方法的建立
    3.3 氨芐青霉素間接競爭ELISA檢測方法性能指標(biāo)的評(píng)價(jià)
第四章 討論
    4.1 LINKER的選擇
    4.2 SCFV的連接
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號(hào)：3846080