米面制品因含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和充足的水分,是許多腐敗菌及致病菌的天然培養(yǎng)基,其中金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,以下簡(jiǎn)稱“S.aureus”)和大腸桿菌O157(Escherichia coli O157),沙門氏菌(Salmonella)及乳桿菌(Lactobacillus)是其常見的污染菌株,目前對(duì)該類食品微生物檢測(cè)手段主要通過國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)法,檢測(cè)程序繁瑣,耗時(shí)較長(zhǎng)。相關(guān)研究表明這四種細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下可進(jìn)入VBNC狀態(tài),從而成功逃避國(guó)家“金標(biāo)準(zhǔn)”檢測(cè),同時(shí),VBNC狀態(tài)的細(xì)菌仍保留其致毒與腐敗特性,造成潛在的食品安全隱患,因此對(duì)其在食品體系中控制消減具有重要的意義。此外,目前對(duì)細(xì)菌VBNC狀態(tài)形成的條件的研究大多集中特定環(huán)境,了解米面食品微生物進(jìn)入VBNC狀態(tài)的關(guān)鍵條件是消除其污染的關(guān)鍵。鑒于此,本研究的主要目的是通過建立一種快速檢測(cè)手段,實(shí)現(xiàn)對(duì)米面食品主要微生物及其VBNC狀態(tài)的檢測(cè)。同時(shí),選取米面食品中常見的金葡菌及大腸桿菌O157為研究對(duì)象,研究外界環(huán)境條件對(duì)其VBNC狀態(tài)形成的影響,獲得其進(jìn)入VBNC狀態(tài)的關(guān)鍵條件。通過獲得的關(guān)鍵條件探究改變相...

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 米面制品概述
        1.1.1 米面制品
        1.1.2 米面制品加工與儲(chǔ)藏過程中的微生物污染來源
        1.1.3 米面制品中主要微生物
    1.2 食源性微生物及其常用鑒定方法
        1.2.1 平板培養(yǎng)法
        1.2.2 免疫學(xué)的檢測(cè)
        1.2.3 核酸檢測(cè)
        1.2.4 生物傳感器檢測(cè)法
    1.3 細(xì)菌活但不可培養(yǎng)狀態(tài)(VBNC)的研究進(jìn)展
        1.3.1 VBNC狀態(tài)形成的誘導(dǎo)因素
        1.3.2 VBNC狀態(tài)的生物學(xué)特性
    1.4 細(xì)菌VBNC狀態(tài)菌的檢測(cè)方法
        1.4.1 活菌直接計(jì)數(shù)法
        1.4.2 LIVE/DEAD試劑盒
        1.4.3 免疫學(xué)技術(shù)
        1.4.4 分子生物學(xué)方法
    1.5 本課題的研究背景、意義和內(nèi)容
        1.5.1 本課題的研究背景和意義
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 米面制品主要微生物PSR快速檢測(cè)體系建立與優(yōu)化
    2.1 前言
    2.2 材料與設(shè)備
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及材料
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 PSR反應(yīng)引物設(shè)計(jì)與合成
        2.3.2 菌株DNA的提取
        2.3.3 PSR等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)體系的建立
        2.3.4 PSR等溫?cái)U(kuò)增體系的優(yōu)化
        2.3.5 優(yōu)化的PSR檢測(cè)方法的特異性與靈敏度分析
        2.3.6 PSR技術(shù)檢測(cè)金葡菌、沙門氏菌及乳桿菌
        2.3.7 人工模擬污染食品樣本檢測(cè)
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 鈣黃綠素與Mn²⁺濃度比對(duì)PSR擴(kuò)增顯色結(jié)果的影響
        2.4.2 甜菜堿濃度對(duì)PSR擴(kuò)增體系的影響
        2.4.3 反應(yīng)時(shí)間對(duì)PSR擴(kuò)增體系的影響
        2.4.4 PSR擴(kuò)增反應(yīng)檢測(cè)大腸桿菌的特異性與靈敏度的檢測(cè)
        2.4.5 PSR技術(shù)檢測(cè)金葡菌、沙門氏菌、乳桿菌特異性評(píng)價(jià)
        2.4.6 PSR技術(shù)檢測(cè)金葡菌、沙門氏菌、乳桿菌的靈敏度分析
        2.4.7 PSR技術(shù)檢測(cè)人工模擬污染食品靈敏度分析
    2.5 小結(jié)
第三章 米面食品微生物VBNC狀態(tài)的檢測(cè)
    3.1 前言
    3.2 材料與設(shè)備
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及材料
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
    3.3 .實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 金葡菌及大腸桿菌O157 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        3.3.2 金葡菌及大腸桿菌O157 VBNC狀態(tài)的誘導(dǎo)
        3.3.3 儲(chǔ)藏過程金葡菌及大腸桿菌O157 可培養(yǎng)數(shù)的測(cè)定
        3.3.4 熒光顯微鏡的觀察
        3.3.5 PMA-PSR檢測(cè)VBNC狀態(tài)的菌株
        3.3.6 PMA-PSR檢測(cè)食品體系中的VBNC狀態(tài)菌
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 金葡菌及大腸桿菌O157 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
        3.4.2 儲(chǔ)藏過程中金葡菌及大腸桿菌O157 可培養(yǎng)數(shù)的變化
        3.4.3 細(xì)菌VBNC狀態(tài)的確定
        3.4.4 不同狀態(tài)的金葡菌及大腸桿菌O157的PMA-PSR檢測(cè)結(jié)果
        3.4.5 PMA-PSR恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)靈敏度評(píng)價(jià)
        3.4.6 PMA-PSR檢測(cè)食品體系中VBNC狀態(tài)菌
    3.5 小結(jié)
第四章 環(huán)境條件對(duì)米面制品微生物VBNC狀態(tài)形成的影響
    4.1 引言
    4.2 材料與設(shè)備
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及材料
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 金葡菌誘導(dǎo)方法
        4.3.2 大腸桿菌O157 誘導(dǎo)方法
        4.3.3 誘導(dǎo)儲(chǔ)存過程中可培養(yǎng)數(shù)的測(cè)定
        4.3.4 熒光顯微鏡觀察
        4.3.5 原子力顯微鏡(AFM)測(cè)定VBNC狀態(tài)細(xì)菌的形貌
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.4.1 儲(chǔ)藏過程中金葡菌可培養(yǎng)數(shù)的變化
        4.4.2 儲(chǔ)藏過程中大腸桿菌O157 的可培養(yǎng)數(shù)的變化
        4.4.3 儲(chǔ)藏后細(xì)菌活性的變化
        4.4.4 原子力顯微鏡測(cè)定VBNC狀態(tài)菌體表面形貌
    4.5 小結(jié)
第五章 米面制品微生物VBNC狀態(tài)的控制與消減
    5.1 引言
    5.2 材料與設(shè)備
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與材料
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 酸度對(duì)VBNC狀態(tài)形成的抑制效果
        5.3.2 營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)對(duì)VBNC狀態(tài)形成的抑制效果
        5.3.3 細(xì)菌的可培養(yǎng)計(jì)數(shù)
        5.3.4 熒光顯微鏡觀察
        5.3.5 米面食品體系中VBNC狀態(tài)的消除
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)論與討論
        5.4.1 酸度對(duì)VBNC狀態(tài)的抑制
        5.4.2 營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)對(duì)VBNC狀態(tài)的抑制
        5.4.3 米面食品體系中VBNC狀態(tài)的消除
    5.5 小結(jié)
結(jié)論與展望
    一、結(jié)論
    二、主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)
    三、展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間所取得的學(xué)術(shù)成果
致謝
附件



本文編號(hào)：3844675