小米蛋白具有低過敏性的優(yōu)良特點,必需氨基酸含量高于小麥和大米,是一種良好的植物蛋白來源。小米蛋白的主要成分是醇溶蛋白,但由于醇溶蛋白含有大量疏水性氨基酸,難溶于水,存在酶水解度低、蛋白轉(zhuǎn)化率不高等問題。此外,關(guān)于小米蛋白肽活性研究大多集中在抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、降血壓等方面,而對于其他生理活性的研究有限,且對于其在細(xì)胞水平以及動物機(jī)體內(nèi)的活性評價較為欠缺。本文首先研究了小米醇溶蛋白(MP)的結(jié)構(gòu)特征,并利用超聲和加熱預(yù)處理對其進(jìn)行改性,然后通過酶法制備了具有抗氧化活性的小米醇溶蛋白肽(MPP)并考察了其活性穩(wěn)定性;再次,應(yīng)用細(xì)胞模型評價了MPP在細(xì)胞水平的抗氧化及抗炎活性,并探索了可能的作用機(jī)理;最后,研究了MPP在小鼠機(jī)體內(nèi)的抗氧化及抗炎活性。主要研究結(jié)果如下:(1)利用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳(SDS-PAGE)、X射線衍射(XRD)、圓二色譜(CD)、原子力顯微鏡(AFM)、氨基酸組成測定等方法分析了小米醇溶蛋白的結(jié)構(gòu)特征。結(jié)果表明,小米醇溶蛋白在11～25 kDa有3條譜帶,17 kDa處譜帶較明顯。小米醇溶蛋白屬于全α型結(jié)構(gòu),為非晶體無定形結(jié)構(gòu)。小米醇溶蛋白呈圓棒狀,外...

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮寫對照表
第一章 緒論
    1.1 小米蛋白簡介
    1.2 小米蛋白肽的制備研究現(xiàn)狀
        1.2.1 蛋白酶水解法
        1.2.2 微生物發(fā)酵法
        1.2.3 物理改性輔助酶解方法
    1.3 小米蛋白肽的生物活性研究進(jìn)展
        1.3.1 抗氧化活性
        1.3.2 免疫調(diào)節(jié)作用
        1.3.3 抑菌活性
        1.3.4 抑制ACE、α-淀粉酶和α-葡萄糖酶活性
        1.3.5 肽的活性穩(wěn)定性研究
    1.4 肽的抗氧化及抗炎活性評價方法
        1.4.1 體外化學(xué)法
        1.4.2 細(xì)胞實驗法
        1.4.3 動物實驗法
    1.5 立題依據(jù)及研究意義
    1.6 主要研究內(nèi)容
第二章 小米醇溶蛋白的結(jié)構(gòu)表征及其酶解工藝研究
    2.1 前言
    2.2 材料與設(shè)備
        2.1.1 實驗材料與試劑
        2.1.2 儀器與設(shè)備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 小米脫脂方法
        2.3.2 小米蛋白的提取
        2.3.3 SDS-PAGE分析
        2.3.4 圓二色光譜分析(CD)
        2.3.5 X射線衍射分析(XRD)
        2.3.6 原子力顯微鏡分析(AFM)
        2.3.7 氨基酸組成分析
        2.3.8 超聲及熱處理方法
        2.3.9 酶解工藝方法
        2.3.10 溶解度測定
        2.3.11 水解度測定
        2.3.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 小米蛋白的分子量分布
        2.4.2 小米蛋白的二級結(jié)構(gòu)
        2.4.3 X射線衍射分析結(jié)果
        2.4.4 小米蛋白的形態(tài)特征
        2.4.5 小米醇溶蛋白的氨基酸組成
        2.4.6 超聲及熱處理對小米醇溶蛋白結(jié)構(gòu)的影響
        2.4.7 超聲及熱處理對小米醇溶蛋白溶解度的影響
        2.4.8 超聲及熱處理對小米醇溶蛋白水解度的影響
    2.5 本章小結(jié)
第三章 小米醇溶蛋白抗氧化肽的分離純化、鑒定及活性穩(wěn)定性評價
    3.1 前言
    3.2 材料與設(shè)備
        3.2.1 材料與試劑
        3.2.2 儀器與設(shè)備
    3.3 實驗方法
        3.3.1 活性肽的超濾分離
        3.3.2 活性肽的分子量分布測定
        3.3.3 活性肽的凝膠色譜分離及RP-HPLC分離純化
        3.3.4 活性肽的抗氧化能力測定
        3.3.5 活性肽的氨基酸序列測定
        3.3.6 活性肽的化學(xué)合成
        3.3.7 肽的抗氧化活性穩(wěn)定性評價
        3.3.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 不同分子量小米醇溶蛋白酶解產(chǎn)物的抗氧化活性
        3.4.2 活性肽的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定
        3.4.3 合成肽的抗氧化活性驗證
        3.4.4 溫度對小米醇溶蛋白肽抗氧化活性的影響
        3.4.5 pH對小米醇溶蛋白肽抗氧化活性的影響
        3.4.6 食品原輔料對小米醇溶蛋白肽抗氧化活性的影響
        3.4.7 金屬離子對小米醇溶蛋白肽抗氧化活性的影響
        3.4.8 體外模擬胃腸道消化對小米醇溶蛋白肽抗氧化活性穩(wěn)定性的影響
    3.5 本章小結(jié)
第四章 小米醇溶蛋白肽在細(xì)胞內(nèi)的抗氧化及抗炎活性研究
    4.1 前言
    4.2 材料與設(shè)備
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 儀器與設(shè)備
    4.3 實驗方法
        4.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組
        4.3.2 細(xì)胞毒性實驗(CCK-8)
        4.3.3 HaCaT細(xì)胞內(nèi)ROS測定
        4.3.4 HaCaT細(xì)胞內(nèi)MDA、GSH含量和SOD、CAT活力的測定
        4.3.5 RAW264.7細(xì)胞中NO含量檢測
        4.3.6 促炎因子濃度檢測
        4.3.7 Western blot檢測
        4.3.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 小米醇溶蛋白肽對HaCaT細(xì)胞毒性的影響
        4.4.2 小米醇溶蛋白肽作用于HaCaT細(xì)胞后的ROS熒光染色結(jié)果
        4.4.3 小米醇溶蛋白肽對HaCaT細(xì)胞內(nèi)MDA、GSH含量的影響
        4.4.4 小米醇溶蛋白肽對HaCaT細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT酶活的影響
        4.4.5 小米醇溶蛋白肽對RAW264.7細(xì)胞毒性及形態(tài)的影響
        4.4.6 小米醇溶蛋白肽對RAW264.7 細(xì)胞釋放NO及合成TNF-α、IL-6和IL-1β的影響
        4.4.7 小米醇溶蛋白肽對RAW264.7 細(xì)胞中p-IκBα和 NF-κB表達(dá)的影響
        4.4.8 小米醇溶蛋白肽對MAPK信號通路中蛋白磷酸化的影響
    4.5 本章小結(jié)
第五章 小米醇溶蛋白肽在動物機(jī)體內(nèi)的抗氧化及抗炎活性研究
    5.1 前言
    5.2 材料與設(shè)備
        5.2.1 材料與試劑
        5.2.2 儀器與設(shè)備
    5.3 實驗方法
        5.3.1 D-半乳糖氧化損傷小鼠模型分組與給藥處理
        5.3.2 血清和組織勻漿液制備
        5.3.3 組織和血清中抗氧化能力相關(guān)指標(biāo)的測定
        5.3.4 DSS誘導(dǎo)小鼠模型分組與給藥處理
        5.3.5 結(jié)腸炎癥癥狀評估方法
        5.3.6 MPO、TNF-α以及IL-6濃度的檢測
        5.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 D-半乳糖氧化損傷小鼠的一般行為學(xué)觀察
        5.4.2 小米醇溶蛋白肽對D-半乳糖氧化損傷小鼠臟器指數(shù)的影響
        5.4.3 小米醇溶蛋白肽對D-半乳糖氧化損傷小鼠血清中T-AOC、細(xì)胞保護(hù)酶活性及MDA水平的影響
        5.4.4 小米醇溶蛋白肽對D-半乳糖氧化損傷小鼠腦組織中細(xì)胞保護(hù)酶活性及MDA水平的影響
        5.4.5 小米醇溶蛋白肽對D-半乳糖氧化損傷小鼠心臟組織中細(xì)胞保護(hù)酶活性及MDA水平的影響
        5.4.6 小米醇溶蛋白肽對D-半乳糖氧化損傷小鼠肝臟組織中細(xì)胞保護(hù)酶活性及MDA水平的影響
        5.4.7 小米醇溶蛋白肽對DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎小鼠的臨床癥狀的影響
        5.4.8 小米醇溶蛋白肽對結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中MPO、TNF-α以及IL-6 含量的影響
    5.5 本章小結(jié)
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
主要創(chuàng)新點
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄 Ⅰ:附圖
附錄 Ⅱ:作者在攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3819199