近年來,食源性疾病的發(fā)病率居高不下,在全世界范圍內(nèi)都是一個日益嚴重的公共衛(wèi)生問題。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)統(tǒng)計顯示由病原微生物引起的食源性疾病比例達50%以上,因此急需建立一種有效的食源性致病菌檢測方法。傳統(tǒng)的食源性病原體檢測和鑒定方法費時費力,不足以滿足食品快速檢測的要求。為阻止疾病的傳播、監(jiān)控食品的衛(wèi)生安全,保障人民的安全,急需建立一種快速、簡單和有效的檢測技術(shù)。本文將腸粘附性大腸桿菌、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌、腸侵襲性大腸桿菌、腸出血性大腸桿菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、假結(jié)核耶爾森菌、結(jié)腸彎曲菌、空腸彎曲菌、副溶血性弧菌、霍亂弧菌、腸炎沙門氏菌、類志賀鄰單胞菌、嗜水氣單胞菌和福氏志賀氏菌為模式菌株,建立一種快速檢測15種食源性致病菌的多重實時PCR技術(shù)。主要研究結(jié)果如下:(1)通過HAND系統(tǒng)建立了一種能夠同時檢測15種食源性致病菌多重實時PCR方法,具有特異性高、靈敏度好、重復性和穩(wěn)定性高等特點,并且適用于復雜樣本的檢測;(2)通過玻璃化技術(shù),將多重實時PCR中熱不穩(wěn)定成分(Taq酶、dNTP、染料和引物)玻璃化到PCR管...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 食源性致病菌
    1.2 病原微生物常用鑒別方法
        1.2.1 傳統(tǒng)培養(yǎng)法
        1.2.2 傳統(tǒng)培養(yǎng)法的優(yōu)化
        1.2.3 免疫學檢測
        1.2.4 核酸檢測
    1.3 研究目的及意義
    1.4 技術(shù)路線
第2章 基于HAND系統(tǒng)食源性致病菌實時PCR檢測技術(shù)的建立
    2.1 材料與設備
        2.1.1 菌株及來源
        2.1.2 培養(yǎng)基和試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 菌株的培養(yǎng)和模板DNA的制備
        2.2.2 靶序列與引物
        2.2.3 單重熒光定量PCR體系的建立
        2.2.4 單重實時PCR的特異性
        2.2.5 單重實時PCR的敏感性
        2.2.6 單重實時PCR的重復性和穩(wěn)定性
        2.2.7 多重實時PCR體系的建立
        2.2.8 多重時候PCR的特異性
        2.2.9 多重實時PCR的敏感性
        2.2.10 多重實時PCR的重復性和穩(wěn)定性
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 單重熒光定量PCR體系的建立
        2.3.2 單重熒光定量PCR特異性結(jié)果
        2.3.3 單重實時PCR敏感性結(jié)果
        2.3.4 單重實時PCR重復性和穩(wěn)定性結(jié)果
        2.3.5 多重實時PCR體系的建立
        2.3.6 多重熒光定量PCR特異性結(jié)果
        2.3.7 多重熒光定量PCR敏感性結(jié)果
        2.3.8 多重熒光定量PCR重復性和穩(wěn)定性結(jié)果
    2.4 本章小結(jié)
第3章 多重實時PCR體系的玻璃化
    3.1 材料與設備
        3.1.1 菌株及來源
        3.1.2 培養(yǎng)基和試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 菌株的培養(yǎng)和模板DNA的制備
        3.2.2 反應體系的玻璃化
        3.2.3 玻璃化試劑穩(wěn)定性
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 反應體系的玻璃化
        3.3.2 玻璃化試劑穩(wěn)定性
    3.4 本章小結(jié)
第4章 復雜樣本的快速提取
    4.1 材料與方法
        4.1.1 菌株及來源
        4.1.2 培養(yǎng)基與試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 復雜樣本快速提取方法
        4.2.1 食品模擬樣本
        4.2.2 糞便模擬標本
    4.3 結(jié)果
    4.4 本章小結(jié)
結(jié)論
展望
創(chuàng)新點
致謝
參考文獻
作者簡介
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文和科研成果



本文編號：3792530