稻谷儲(chǔ)藏后的品質(zhì)不僅取決于儲(chǔ)藏環(huán)境和技術(shù),更取決于儲(chǔ)藏前的品質(zhì),這是由基因決定的。實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)類(lèi)受體蛋白激酶FERONIA(FER)同源基因FLR1參與調(diào)控水稻淀粉合成并影響種子大小以及淀粉結(jié)構(gòu)。本研究進(jìn)一步比較FER野生型和突變株種子在人工老化試驗(yàn)條件下的發(fā)芽率,初步發(fā)現(xiàn)FER蛋白表達(dá)正向調(diào)控種子儲(chǔ)藏性能。在此基礎(chǔ)上,探尋水稻FLR1互作蛋白,并在大腸桿菌中表達(dá)重組FLR1蛋白,用純化蛋白免疫大鼠,獲得FLR1特異抗血清,為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:(1)人工老化3-9天后,擬南芥FER基因突變后的fer4種子發(fā)芽率顯著低于野生型種子老化后的發(fā)芽率。水稻FER同源基因FLR1過(guò)表達(dá)植株種子老化前發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽率均低于野生型的,經(jīng)過(guò)20天人工老化后,其發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽率高于野生型的。說(shuō)明FER/FLR1基因產(chǎn)物正向調(diào)控種子耐儲(chǔ)性。(2)通過(guò)酵母雙雜交文庫(kù)篩選,得到了28個(gè)水稻FLR1結(jié)合蛋白,并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)了 7個(gè)蛋白與FLR1有互作。(3)為了獲得FLR1抗體用于后續(xù)功能分析,將FLR1的N端和C端分別構(gòu)建到表達(dá)載體pET-32a、pGEX-4T-1、pET-22b和pTr...

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 稻谷儲(chǔ)藏及影響儲(chǔ)藏品質(zhì)的因素
        1.1.1 儲(chǔ)糧歷史
        1.1.2 儲(chǔ)糧現(xiàn)狀
        1.1.3 影響儲(chǔ)藏品質(zhì)的因素
    1.2 RLK家族基因與水稻FLR基因
        1.2.1 RLK家族基因
        1.2.2 Feronia
        1.2.3 水稻OsFLR家族基因
    1.3 研究目的與意義
    1.4 本課題的研究基礎(chǔ)及技術(shù)路線
        1.4.1 研究基礎(chǔ)
        1.4.2 技術(shù)路線
2 材料和方法
    2.1 試劑和材料
        2.1.1 主要材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 試劑配制
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 種子老化發(fā)芽實(shí)驗(yàn)
        2.2.2 生物信息分析
        2.2.3 水稻材料的種植
        2.2.4 互作蛋白篩選及驗(yàn)證
        2.2.5 基因克隆與載體構(gòu)建
        2.2.6 蛋白質(zhì)表達(dá)及純化
        2.2.7 抗體制備及驗(yàn)證
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 水稻FLR1與稻谷儲(chǔ)藏
        3.1.1 擬南芥fer4突變種子影響種子耐儲(chǔ)性能
        3.1.2 生物信息分析
        3.1.3 水稻種子發(fā)芽
    3.2 酵母篩庫(kù)
        3.2.1 互作蛋白篩選結(jié)果
        3.2.2 互作驗(yàn)證結(jié)果
    3.3 水稻FLR1的抗體制備及驗(yàn)證
        3.3.1 OsFLR1基因克隆
        3.3.2 OsFLR1蛋白表達(dá)及純化
        3.3.3 OsFLR1抗體驗(yàn)證
4 討論
5 結(jié)論
6 展望
7 課題創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3774438