魚類中富含豐富的蛋白質,其中蘊含著多種已知和未知的過敏原。這些過敏原蛋白質對消化酶常常具有抵抗作用,研究魚類蛋白質在體外模擬胃液消化中的穩(wěn)定性對預測蛋白是否具有致敏性具有重要的參考價值。本文通過體外模擬胃液消化得到牙鲆魚和大黃魚蛋白質酶解液,通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、介孔材料分離富集兩種魚蛋白酶解液中耐消化的蛋白質。結合蛋白質組學及蛋白質序列同源性的分析方法,研究了牙鲆魚和大黃魚酶解液中含有的潛在過敏原,為食物中潛在過敏原的篩選提供參考。研究結果如下:(1)將提取的牙鲆魚、大黃魚蛋白質進行體外模擬胃液消化。通過SDS-PAGE凝膠電泳分離耐胃蛋白酶酶解的蛋白質,運用蛋白質組學的方法和高效液相色譜-串聯質譜聯用(HPLC-MS/MS)技術對蛋白質進行分析。在牙鲆魚中共鑒定到5種耐胃蛋白酶酶解的蛋白質,大黃魚中共鑒定到7種耐胃蛋白酶酶解的蛋白質。其中來源于牙鲆魚的原肌球蛋白alpha-1以及來源于大黃魚的原肌球蛋白alpha-1和alpha-4分別與已知過敏原Ore m 4的蛋白質序列進行對比,三組蛋白質的一致性分別為96.5%、81%和78%。相似性分別...

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【學位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 食物過敏原
        1.1.1 食物過敏反應機制
        1.1.2 水產品中主要的過敏原
        1.1.3 控制食物過敏的有效方法
        1.1.4 食物過敏原的檢測方法
    1.2 蛋白質組學
        1.2.1 蛋白質組學概述
        1.2.2 蛋白質組學的研究策略
    1.3 介孔材料
    1.4 本文研究內容
第二章 液相色譜-串聯質譜聯用技術篩選魚蛋白質中潛在過敏原
    2.1 引言
    2.2 試劑與儀器
        2.2.1 實驗試劑
        2.2.2 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 蛋白樣品的制備
        2.3.2 對魚蛋白進行體外模擬胃液消化
        2.3.3 SDS-PAGE凝膠電泳
        2.3.4 魚蛋白的酶解與膠內酶解
        2.3.5 液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)分析
        2.3.6 數據檢索與分析
        2.3.7 蛋白質同源性分析
    2.4 結果與討論
        2.4.1 魚蛋白質體外模擬胃液消化
        2.4.2 魚蛋白質的LC-MS/MS分析
        2.4.3 耐酶解蛋白質的LC-MS/MS分析
        2.4.4 魚蛋白中耐消化蛋白質同源性分析
    2.5 小結
第三章 介孔材料對魚類蛋白質酶解液吸附性能研究
    3.1 引言
    3.2 試劑與儀器
        3.2.1 實驗試劑
        3.2.2 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 介孔材料的制備
        3.3.2 介孔材料的表征
        3.3.3 介孔材料對魚蛋白質的吸附性能研究
    3.4 結果與討論
        3.4.1 介孔材料的表征
        3.4.2 介孔材料吸附性能的研究
    3.5 小結
第四章 介孔材料吸附法與超濾法分離富集耐酶解蛋白質
    4.1 引言
    4.2 試劑與儀器
        4.2.1 實驗試劑
        4.2.2 實驗儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 魚蛋白質樣品的制備
        4.3.2 魚蛋白體外模擬胃液消化
        4.3.3 介孔材料的制備
        4.3.4 酶解液中耐酶解蛋白質的分離富集
        4.3.5 蛋白濃度的測定
        4.3.6 液相色譜-串聯質譜(LC-MS/MS)分析
        4.3.7 數據檢索與分析
    4.4 結果與討論
        4.4.1 蛋白濃度測定
        4.4.2 超濾法富集耐酶解蛋白質的LC-MS/MS分析
        4.4.3 介孔材料分離耐酶解蛋白質的LC-MS/MS分析
    4.5 小結
結論
參考文獻
攻讀碩士期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3773897