食品安全問(wèn)題是一個(gè)全球性的公共衛(wèi)生安全問(wèn)題,一直都是社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn),因?yàn)檫@關(guān)系著每個(gè)人的切身利益,而其中,由食源性致病菌引起的食品安全問(wèn)題更是日前人們最為關(guān)注的點(diǎn)。因?yàn)槭吃葱灾虏【哂泻艽笪：π郧液艽蟮赜绊懯称肺廴?因此,建立快速、便捷、靈敏的食源性致病菌檢測(cè)方法對(duì)預(yù)防食品安全問(wèn)題以及保護(hù)人類健康問(wèn)題具有很重要意義。阪崎克羅諾桿菌（Cronobacter sakazakii）是一種食源性條件致病菌,會(huì)引起一系列病癥,其中包括敗血癥、壞死性結(jié)腸炎以及新生兒腦膜炎。該菌可存在于牛奶、蔬菜、肉類和茶等各種食物內(nèi),但嬰幼兒配方奶粉（powdered infant formula,PIF）是其最主要的污染源。由于阪崎腸桿菌對(duì)新生兒具有巨大的潛在風(fēng)險(xiǎn),已被FAO-WHO正式確認(rèn)為A類病原體。本論文基于阪崎克羅諾桿菌的特異序列及特異性結(jié)構(gòu)構(gòu)建了四種阪崎克羅諾桿菌活菌的快速檢測(cè)方法,簡(jiǎn)述如下:1)建立了基于逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcriptase–Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）核酶的阪崎克羅諾桿菌活菌的電化學(xué)檢測(cè)方法。在該研究中,首先對(duì)阪崎克... 

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 課題來(lái)源
    1.2 課題研究的目的和意義
    1.3 課題研究背景
        1.3.1 阪崎克羅諾桿菌簡(jiǎn)介
        1.3.2 阪崎克羅諾桿菌的生理生化特性
        1.3.3 污染源
        1.3.4 阪崎克羅諾桿菌檢測(cè)方法的國(guó)內(nèi)外概況
        1.3.5 G-四鏈體/hemin核酶
    1.4 活菌檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展
        1.4.1 檢測(cè)靶標(biāo)的選擇
        1.4.2 DNA結(jié)合染料
        1.4.3 核酸適配體
    1.5 論文的主要研究?jī)?nèi)容
第二章 基于RT-PCR偶聯(lián)DNAzyme的阪崎克羅諾桿菌活菌的電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 菌株及實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 試劑配制
        2.2.3 主要儀器設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 阪崎克羅諾桿菌活菌電化學(xué)檢測(cè)方法
        2.3.2 細(xì)菌的培養(yǎng)與計(jì)數(shù)
        2.3.3 RNA提取
        2.3.4 引物設(shè)計(jì)
        2.3.5 RT-PCR反應(yīng)引物設(shè)計(jì)
        2.3.6 電化學(xué)檢測(cè)
        2.3.7 Hemin濃度的優(yōu)化
        2.3.8 底物的優(yōu)化
        2.3.9 電化學(xué)檢測(cè)的特異性評(píng)價(jià)
        2.3.10 電化學(xué)檢測(cè)的靈敏度測(cè)定
        2.3.11 人工污染樣品檢測(cè)
    2.4 結(jié)果分析
        2.4.1 阪崎克羅諾桿菌電化學(xué)檢測(cè)方法可行性驗(yàn)證
        2.4.2 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        2.4.3 電化學(xué)檢測(cè)的特異性評(píng)價(jià)
        2.4.4 電化學(xué)檢測(cè)的靈敏度測(cè)定
        2.4.5 人工污染樣品檢測(cè)結(jié)果
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第三章 基于LAMP和PMA的阪崎克羅諾桿菌活菌的可視化檢測(cè)技術(shù)
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 菌株及實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 試劑配制
        3.2.3 主要儀器設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 基于LAMP與PMA的可視化檢測(cè)方法原理
        3.3.2 菌液的制備
        3.3.3 菌落裂解
        3.3.4 LAMP引物設(shè)計(jì)
        3.3.5 PMA處理
        3.3.6 LAMP反應(yīng)
        3.3.7 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        3.3.8 基于LAMP-PMA可視化檢測(cè)特異性評(píng)價(jià)
        3.3.9 基于LAMP-PMA可視化檢測(cè)靈敏度測(cè)定
        3.3.10 人工污染樣品檢測(cè)
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 最佳反應(yīng)條件的確定
        3.4.2 基于LAMP-PMA可視化檢測(cè)特異性評(píng)價(jià)
        3.4.3 基于LAMP-PMA可視化檢測(cè)靈敏度測(cè)定
        3.4.4 人工污染樣品檢測(cè)結(jié)果
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第四章 基于RT-PSR的阪崎克羅諾桿菌活菌的可視化檢測(cè)技術(shù)
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 菌株及實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 試劑配制
        4.2.3 主要儀器設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 基于RT-PSR可視化檢測(cè)方法原理
        4.3.2 細(xì)菌的培養(yǎng)與計(jì)數(shù)
        4.3.3 RNA提取
        4.3.4 引物設(shè)計(jì)
        4.3.5 可視化檢測(cè)
        4.3.6 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        4.3.7 基于RT-PSR可視化檢測(cè)的特異性評(píng)價(jià)
        4.3.8 基于RT-PSR可視化檢測(cè)的靈敏度測(cè)定
        4.3.9 人工污染樣品檢測(cè)
    4.4 結(jié)果分析
        4.4.1 RT-PSR可視化檢測(cè)反應(yīng)溫度的優(yōu)化
        4.4.2 RT-PSR可視化檢測(cè)反應(yīng)時(shí)間的優(yōu)化
        4.4.3 d NTP濃度的優(yōu)化
        4.4.4 基于RT-PSR可視化檢測(cè)特異性評(píng)價(jià)
        4.4.5 基于RT-PSR可視化檢測(cè)靈敏度測(cè)定
        4.4.6 人工污染樣品檢測(cè)結(jié)果
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
第五章 基于適配體偶聯(lián)DNAzyme的阪崎克羅諾桿菌活菌的可視化檢測(cè)技術(shù)
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.1 菌株及實(shí)驗(yàn)試劑
        5.2.2 試劑配制
        5.2.3 主要儀器設(shè)備
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 基于適配體-DNAzyme的阪崎克羅諾桿菌無(wú)酶可視化檢測(cè)原理
        5.3.2 細(xì)菌的培養(yǎng)與計(jì)數(shù)
        5.3.3 引物設(shè)計(jì)
        5.3.4 可視化檢測(cè)
        5.3.5 Hemin濃度的優(yōu)化
        5.3.6 溫育溫度的優(yōu)化
        5.3.7 可視化檢測(cè)特異性評(píng)價(jià)
        5.3.8 可視化檢測(cè)靈敏度測(cè)定
        5.3.9 人工污染樣品檢測(cè)
    5.4 結(jié)果和分析
        5.4.1 阪崎克羅諾桿菌可視化檢測(cè)可行性分析
        5.4.2 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        5.4.3 可視化檢測(cè)特異性評(píng)價(jià)
        5.4.4 可視化檢測(cè)靈敏度測(cè)定
        5.4.5 人工污染樣品檢測(cè)結(jié)果
    5.5 討論
    5.6 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
作者在攻讀碩士學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增-無(wú)電加熱法檢測(cè)乳中阪崎克羅諾桿菌[J]. 付世騫,曲艷艷,馮曉涵,滿朝新,姜毓君.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2018(03)
[2]2001-2013年中國(guó)重大食物中毒事件的分析評(píng)價(jià)[J]. 杜蘇萍,王敬敬,張昭寰,孫曉紅,潘迎捷,趙勇.  上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(02)
[3]阪崎克羅諾桿菌TaqMan-MGB探針實(shí)時(shí)熒光PCR快速檢測(cè)技術(shù)研究[J]. 黃燾,周蒂,王莉萍.  環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué). 2013(11)
[4]基于rpoB基因的阪崎克羅諾桿菌分子檢測(cè)體系的建立及其應(yīng)用[J]. 周勝利,黃佳,晁愛(ài)敏,于海燕,顧卿,韓明春,徐杭英,周斌.  安全與環(huán)境學(xué)報(bào). 2012(04)
[5]阪崎腸桿菌及與腸桿菌科其他細(xì)菌差異比較[J]. 高建新,傅松哲,龍慧,肖菊珍.  中國(guó)乳品工業(yè). 2011(02)
[6]淺談生物安全實(shí)驗(yàn)室及其在質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫領(lǐng)域中的應(yīng)用[J]. 姜雯,薛巍,王慶貴.  中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化. 2006(09)

碩士論文
[1]基于核酸適配體的赭曲霉毒素A和伏馬毒素B1檢測(cè)方法研究[D]. 桂海孌.浙江農(nóng)林大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3669909