隨著人們的生活不斷的提升,人們對(duì)于的生活的質(zhì)量的要求也不斷提高,特別對(duì)于的食品安全的要求尤其在意。阿維菌素作為一個(gè)農(nóng)用獸用藥,是目前為止使用的最廣泛的農(nóng)獸藥之一,在食品中存在殘留的可能性。因而建立一種快速有效檢測(cè)阿維菌素的方法密切關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)是利用修飾阿維菌素使之偶聯(lián)蛋白質(zhì)去免疫新西蘭大白兔獲得多克隆抗體,在獲得多克隆抗體的基礎(chǔ)上,結(jié)合介孔二氧化硅包裹的正電荷納米金建立了對(duì)樣品中阿維菌素的殘留的檢測(cè)。首先采用化學(xué)合成方法修飾阿維菌素分子使之更容易偶聯(lián)蛋白,接著采用碳二亞胺法將其與大分子蛋白牛血清蛋白和卵清蛋白偶聯(lián)作為免疫抗原和包被抗原。經(jīng)紅外光譜驗(yàn)證阿維菌素修飾物合成,經(jīng)過(guò)紫外吸收和SDS-PAGE鑒定阿維菌素的免疫抗原和包被抗原的合成。接著用免疫抗原去免疫新西蘭大白兔的得到多克隆抗體。通過(guò)化學(xué)合成合成正電荷納米材料,同時(shí)由于納米金帶著正電荷的原因容易聚集沉淀,所以在這個(gè)基礎(chǔ)上本人添加介孔二氧化硅作為載體,能夠有效的使納米材料更好地分離和活性物質(zhì)更好地暴露。通過(guò)掃描電鏡,透射電鏡,元素映射,N₂吸附-脫附,X射線衍射,能量色散X射線和Zeta電位儀等方法驗(yàn)證納米材... 

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 前言
    1.2 農(nóng)獸藥殘留
        1.2.1 農(nóng)藥殘留及其危害
        1.2.2 獸藥殘留及其危害
    1.3 關(guān)于阿維菌素和其類似物
        1.3.1 阿維菌素簡(jiǎn)介
        1.3.2 阿維菌素及其類似物的物化性質(zhì)
        1.3.3 作用機(jī)理
    1.4 檢測(cè)方法
        1.4.1 儀器方法
        1.4.2 免疫分析方法
    1.5 納米材料的發(fā)展
    1.6 本課題研究意義
第二章 阿維菌素抗原的制備
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.3 常用的緩沖液的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.3.1 阿維菌素半抗原修飾
        2.3.2 阿維菌素修飾物的活化
        2.3.3 阿維菌素抗原的制備
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 紅外光譜鑒定結(jié)果
        2.4.2 阿維菌素合成抗原的表征
第三章 阿維菌素抗體的制備和測(cè)定
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        3.2.3 常用的緩沖液的配制
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)步驟
        3.3.1 動(dòng)物免疫
        3.3.2 抗體效價(jià)的測(cè)定
        3.3.3 抗原抗體的最佳濃度選擇
        3.3.4 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        3.3.5 樣品制備
        3.3.6 競(jìng)爭(zhēng)ELISA的建立和標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.3.7 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)和特異性實(shí)驗(yàn)
        3.3.8 液相色譜條件
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 免疫血清效價(jià)的測(cè)定
        3.4.2 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        3.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.4.4 高效液相測(cè)量樣品
第四章 納米材料的制備和免疫方法的建立
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)耗材
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 常用緩沖溶液的配置
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 正電荷納米金的制備
        4.3.2 介孔二氧化硅包裹的正電荷納米金的制備
        4.3.3 納米材料偶聯(lián)抗體
        4.3.4 基于納米材料的酶聯(lián)免疫方法的建立
        4.3.5 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        4.3.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        4.3.7 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)和特異性實(shí)驗(yàn)
        4.3.8 方法準(zhǔn)確性驗(yàn)證
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 納米材料的表征
        4.4.2 方法可行性的研究
        4.4.3 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        4.4.4 方法學(xué)的建立和驗(yàn)證
結(jié)論與展望
    結(jié)論
    展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間發(fā)表論文和申請(qǐng)專利
致謝



本文編號(hào)：3662036