藍(lán)色刺孢霉（Quambalaria cyanescens）是從紅曲米中分離純化得的一種凝乳酶（Milk-Clotting Enzyme,MCE）產(chǎn)生菌種,其所產(chǎn)MCE具有優(yōu)良的凝乳特性,從酶本質(zhì)上來(lái)說(shuō)是一種天冬氨酸蛋白酶（Aspartic Protease,APs）,凝乳活力可達(dá)610.52 SU/mL;因此,藍(lán)色刺孢霉是一種發(fā)展?jié)摿薮蟮奈⑸锬槊干a(chǎn)菌種,本研究運(yùn)用相關(guān)技術(shù)手段及實(shí)驗(yàn)方法探究分離純化后的藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)MCE對(duì)大豆蛋白聚集特性的影響,并研究其誘導(dǎo)形成的豆乳/牛乳混制凝膠的特性,可提高我國(guó)大豆資源以及乳品資源的綜合利用水平,為我國(guó)大豆蛋白產(chǎn)業(yè)的精深加工提供理論基礎(chǔ)以及科學(xué)指導(dǎo)。（1）采用離心、微濾對(duì)經(jīng)培養(yǎng)發(fā)酵的藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)MCE進(jìn)行初步分離,隨后利用30kDa、100kDa的pall超濾系統(tǒng)對(duì)粗酶液進(jìn)行富集濃縮,并通過(guò)DEAE cellulose 52陰離子交換柱與G-75葡聚糖凝膠柱進(jìn)行純化分離,所得MCE凝乳活力達(dá)373.7 IMCU/mg,酶活回收率為31.5%,純化倍數(shù)為5.7,經(jīng)SDS-PAGE驗(yàn)證得其純度達(dá)95%以上。（2）將分離純化后的MCE與κ-酪蛋... 

【文章來(lái)源】：齊魯工業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 微生物凝乳酶概述
        1.1.1 凝乳酶簡(jiǎn)介及研究進(jìn)展
        1.1.2 藍(lán)色刺孢霉及其他產(chǎn)凝乳酶微生物簡(jiǎn)介
    1.2 大豆蛋白組成結(jié)構(gòu)及功能性質(zhì)
        1.2.1 大豆概述
        1.2.2 大豆蛋白的組成
        1.2.3 大豆蛋白的功能性質(zhì)及應(yīng)用
        1.2.4 大豆分離蛋白的聚集特性
    1.3 大豆分離蛋白的改性
        1.3.1 物理方法改性
        1.3.2 化學(xué)方法改性
        1.3.3 酶法改性
    1.4 豆乳/牛乳混制干酪的概述
    1.5 本課題立題意義及主要內(nèi)容
第2章 藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)凝乳酶的分離純化及酶學(xué)特性的研究
    2.1 引言
    2.2 試驗(yàn)材料與儀器
        2.2.1 材料與試劑
        2.2.2 儀器與設(shè)備
    2.3 研究方法
        2.3.1 藍(lán)色刺孢霉的發(fā)酵培養(yǎng)
        2.3.2 粗酶液制備
        2.3.3 藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)MCE的分離純化
        2.3.4 藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)MCE的酶學(xué)特性研究
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)MCE的分離純化
        2.4.2 藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)MCE的酶動(dòng)力學(xué)
        2.4.3 藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)MCE的熱穩(wěn)定性研究
        2.4.4 pH對(duì)藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)MCE的影響
        2.4.5 Ca~(2+)對(duì)藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)MCE的穩(wěn)定性作用研究
        2.4.6 對(duì)κ-CN的酶切位點(diǎn)及水解偏好性研究
    2.5 本章小結(jié)
第3章 藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)凝乳酶對(duì)大豆分離蛋白的作用研究
    3.1 引言
    3.2 試驗(yàn)材料與儀器
        3.2.1 材料與試劑
        3.2.2 儀器與設(shè)備
    3.3 研究方法
        3.3.1 大豆分離蛋白(SPI)的制備
        3.3.2 不同酶處理時(shí)間的SPI制備
        3.3.3 SDS-PAGE凝膠電泳表征SPI酶處理前后的組分變化
        3.3.4 不同MCE處理時(shí)間下SPI水解度的測(cè)定
        3.3.5 不同MCE處理時(shí)間下SPI濁度的測(cè)定
        3.3.6 不同MCE處理時(shí)間下SPI持水性測(cè)定
        3.3.7 不同MCE處理時(shí)間下SPI起泡性能的測(cè)定
        3.3.8 不同MCE處理時(shí)間下SPI熱性能的測(cè)定
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 SDS-PAGE凝膠電泳表征SPI酶處理前后的組分變化
        3.4.2 不同酶處理下時(shí)間SPI的水解度與濁度
        3.4.3 不同酶處理時(shí)間下SPI的持水性的變化
        3.4.4 不同酶處理時(shí)間下SPI起泡特性的變化
        3.4.5 不同酶處理時(shí)間下SPI的熱力學(xué)性質(zhì)的變化
    3.5 本章小結(jié)
第4章 藍(lán)色刺孢霉所產(chǎn)MCE對(duì)大豆分離蛋白聚集特性的作用研究
    4.1 引言
    4.2 試驗(yàn)材料與儀器
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 儀器與設(shè)備
    4.3 研究方法
        4.3.1 MCE處理后SPI的 Zeta電位及平均粒徑的測(cè)定
        4.3.2 MCE處理后SPI巰基及二硫鍵含量的測(cè)定
        4.3.3 MCE處理后SPI的內(nèi)源熒光光譜
        4.3.4 MCE處理后SPI的表面疏水性測(cè)定
        4.3.5 MCE處理后SPI的二級(jí)結(jié)構(gòu)的表征
        4.3.6 SPI聚集體中分子間作用力的表征
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 MCE處理后SPI的 Zeta電位及平均粒徑的測(cè)定
        4.4.2 MCE處理后SPI巰基(SH)及二硫鍵(SS)含量的測(cè)定
        4.4.3 MCE處理后SPI的內(nèi)源熒光光譜變化的表征
        4.4.4 MCE處理后SPI的表面疏水性測(cè)定
        4.4.5 MCE處理后SPI的二級(jí)結(jié)構(gòu)的表征
        4.4.6 酶誘導(dǎo)形成的SPI聚集體中分子間作用力的表征
    4.5 本章小結(jié)
第5章 大豆分離蛋白聚集行為的表征及豆乳/牛乳混制凝膠體系特性的研究
    5.1 引言
    5.2 試驗(yàn)材料與儀器
        5.2.1 材料與試劑
        5.2.2 儀器與設(shè)備
    5.3 研究方法
        5.3.1 激光共聚焦顯微鏡(laser scanning confocal microscopy,LSCM)對(duì)SPI聚集行為的表征
        5.3.2 原子力顯微鏡(Atomic Force Microscope,AFM)對(duì)SPI聚集體微觀形態(tài)的表征
        5.3.3 豆乳/牛乳混制凝膠的制備
        5.3.4 豆乳/牛乳混制凝膠流變性質(zhì)的測(cè)定
        5.3.5 豆乳/牛乳混制凝膠的分形分析
        5.3.6 掃描電鏡對(duì)豆乳/牛乳混制凝膠微觀結(jié)構(gòu)的表征
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 激光共聚焦顯微鏡(laser scanning confocal microscopy,LSCM)對(duì)SPI聚集行為的表征
        5.4.2 原子力顯微鏡(Atomic Force Microscope,AFM)對(duì)SPI聚集體微觀形態(tài)的表征
        5.4.3 豆乳/牛乳混制凝膠流變性質(zhì)的測(cè)定
        5.4.4 豆乳/牛乳混制凝膠體系的分形分析
        5.4.5 掃描電鏡對(duì)豆乳/牛乳混制凝膠微觀結(jié)構(gòu)的表征
    5.5 本章小結(jié)
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間主要科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同凝固劑誘導(dǎo)大豆蛋白冷凝膠的流變特性及分形結(jié)構(gòu)分析[J]. 倪俊杰,傅玉穎,李可馨,沈亞麗,王美.  中國(guó)食品學(xué)報(bào). 2018(07)
[2]天冬氨酸蛋白酶的研究及其在飲料業(yè)中的應(yīng)用[J]. 田璐.  食品工業(yè). 2016(06)
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[4]1種高產(chǎn)凝乳酶菌株復(fù)合誘變選育及所產(chǎn)酶酶學(xué)性質(zhì)研究[J]. 王成忠,饒鴻雁,畢德成.  中國(guó)食品學(xué)報(bào). 2015(09)
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博士論文
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[2]超高靜壓協(xié)同酶法降低專用大豆分離蛋白致敏性的研究[D]. 李慧靜.江南大學(xué) 2013
[3]大豆蛋白熱聚集行為及界面、乳化性質(zhì)研究[D]. 王金梅.華南理工大學(xué) 2012
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碩士論文
[1]大豆蛋白酶解聚集的原因及其抑制途徑的初探[D]. 黃蘇.江南大學(xué) 2017
[2]鹽離子對(duì)大豆分離蛋白凝膠特性和微結(jié)構(gòu)影響研究[D]. 劉德陽(yáng).江南大學(xué) 2015
[3]乳酸發(fā)酵豆乳凝膠質(zhì)地：不同溫度熱燙大豆制備豆乳的比較[D]. 彭星云.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]大豆干酪加工技術(shù)研究[D]. 張琦.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[5]動(dòng)態(tài)超高壓均質(zhì)對(duì)大豆分離蛋白改性的研究[D]. 汪菁琴.南昌大學(xué) 2007
[6]大豆分離蛋白酶法改性及其在培養(yǎng)基中的應(yīng)用[D]. 李玉珍.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3605234