魚類是人類重要的食物來源,不僅味道鮮美而且營養(yǎng)豐富。新鮮魚肉中富含15%²0%的全價蛋白,1%¹0%的脂肪,并富含重要的不飽和脂肪酸。我國是水產(chǎn)養(yǎng)殖大國,占世界養(yǎng)殖水產(chǎn)品產(chǎn)量的70%以上,淡水漁業(yè)總面積達(dá)1760萬公頃占國土面積的1.8%。魚類及其制品含有豐富的營養(yǎng),同時也是FAO及WHO認(rèn)定的導(dǎo)致人類過敏的八大類食物之一。其中魚肉中的小清蛋白（parvalbumin,PV）被視為主要的過敏原,因此開展針對魚類及其制品中小清蛋白強特異性、高靈敏度的檢測具有重要的理論和現(xiàn)實意義。本文研究主要包括小清蛋白單克隆抗體的制備及鑒定、金磁復(fù)合納米微粒的制備以及小清蛋白金磁免疫層析檢測方法的建立。具體研究內(nèi)容如下:1.小清蛋白單克隆抗體的制備以高純度的PV免疫7只BALB/c小鼠,利用間接ELISA方法測小鼠抗血清效價,獲取效價最高的小鼠。取免疫小鼠的脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞進行細(xì)胞融合,獲得雜交瘤細(xì)胞。間接ELISA方法篩選陽性孔,有限稀釋法進行3次亞克隆得到分泌同質(zhì)的雜交瘤細(xì)胞株。采用小鼠體內(nèi)誘生腹水法大量制備單抗。采用辛酸-硫酸銨沉淀法純化單抗... 

【文章來源】：上海師范大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小青蛋白金磁性免疫層析試紙的研究內(nèi)容

圖 2-1 小鼠抗血清效價分析圖 2-1 中的結(jié)果顯示，在第六次免疫后，3 號和 5 號小鼠的抗血清效價為28000，免疫效果良好。根據(jù)細(xì)胞融合實驗的要求，使用 3 號小鼠的脾細(xì)胞為細(xì)胞融合材料，使用 5 號小鼠的脾細(xì)胞作為備選。.4.2 雜交瘤細(xì)胞融合和陽性孔制備在 5 塊板中有細(xì)胞團生長的孔數(shù)為 425，融合率為 88.5%。經(jīng)過兩次換液養(yǎng)，融合第 9 天取細(xì)胞上清檢測陽性孔，100μL/孔，用間接 ELISA 法檢測到，小清蛋白融合細(xì)胞板中有 21 個陽性孔，在細(xì)胞板中 21 個陽性孔中挑長勢良好的 5 個強陽性孔（OD450> 1.3）進行亞克。經(jīng)過三次亞克隆和篩后，篩選出三個具有強陽性結(jié)果和良好生長的雜交瘤細(xì)胞，命名為 2A1，C3 和 3C3。亞克隆的目的是純化細(xì)胞，在亞克隆過程中，應(yīng)盡可能選擇單細(xì)胞克隆組的孔。最后選擇的細(xì)胞系可以是滿足要求的純細(xì)胞。此外，當(dāng)細(xì)胞板中檢測到強陽性孔時，應(yīng)盡快進行亞克隆以篩選細(xì)胞。以避免陽性

圖 2-2 小清蛋白單克隆抗體效價分析2.4.4 腹水的純化及鑒定為了獲得小清蛋白單克隆抗體，必須濃縮和純化小鼠的腹水。鑒定純化腹水純度的方法是 SDS-PAGE，單克隆抗體濃度鑒定結(jié)果如圖所示。輕鏈蛋白的分子量約為 26KD。重鏈及輕鏈清晰可見，且圖中并未見多余雜條帶的出現(xiàn)，這就說明了該單克隆抗體純度很高，為后續(xù)的免疫層析檢測打好了基礎(chǔ)。M 1 2 3Heave chain

【參考文獻】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3582963