T-2毒素是由多種真菌產(chǎn)生的一種毒性很強(qiáng)的單端孢霉烯族毒素,比較廣泛存在于谷物及飼料中。若人和動物食用被T-2毒素污染的谷物或飼料,將會對人類和動物的健康構(gòu)成潛在危害。免疫分析方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)及操作簡便等特點,可用于大規(guī)模、快速檢測T-2毒素的殘留。本論文采用雜交瘤細(xì)胞融合法制備T-2毒素單克隆抗體,通過對反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化,建立了酶聯(lián)免疫吸附分析法、化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫吸附分析法及免疫親和柱-高效液相色譜法,并對小麥和玉米等糧谷類食品中T-2毒素進(jìn)行檢測分析。1.T-2毒素單克隆抗體的制備用人工合成的免疫抗原T-2-BSA免疫Balb/c小鼠,采用電融合法將骨髓瘤細(xì)胞SP2/0與小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行融合,成功獲得兩株分泌T-2毒素單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞3B2、8C3,其中8C3的競爭效果更好,所以選雜交瘤細(xì)胞8C3制備T-2毒素單克隆抗體。采用辛酸-硫酸銨法和蛋白G柱法純化單抗腹水,測其濃度為3.58 mg/m L。2.酶聯(lián)免疫吸附分析法的建立對酶聯(lián)免疫吸附分析法反應(yīng)體系中的抗原包被濃度、抗體稀釋比例、酶標(biāo)二抗稀釋比例、甲醇濃度、離子強(qiáng)度、p H等影響因素進(jìn)行優(yōu)化,確定了T-2抗原和T...

【文章來源】： 江西科技師范大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 T-2毒素的概述
        1.1.1 T-2毒素的理化性質(zhì)
        1.1.2 T-2毒素的毒性作用
    1.2 T-2毒素的相關(guān)法規(guī)
    1.3 T-2毒素的來源
    1.4 T-2毒素分析檢測方法的研究
        1.4.1 生物檢測方法
        1.4.2 薄層色譜法
        1.4.3 高效液相色譜法及其聯(lián)用技術(shù)
        1.4.4 氣相色譜及其聯(lián)用技術(shù)
        1.4.5 免疫學(xué)檢測方法
    1.5 本課題的研究目的與主要內(nèi)容
第2章 T-2毒素單克隆抗體的制備
    2.1 實驗試劑與儀器
        2.1.1 實驗主要試劑
        2.1.2 實驗主要儀器
        2.1.3 實驗所用溶液的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠的免疫
        2.2.2 血清效價的測定
        2.2.3 血清特異性的測定
    2.3 T-2毒素單克隆抗體制備
        2.3.1 骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備
        2.3.2 小鼠脾臟細(xì)胞的準(zhǔn)備
        2.3.3 細(xì)胞融合
        2.3.4 飼養(yǎng)細(xì)胞的制備
        2.3.5 融合細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3.6 雜交瘤細(xì)胞的篩選
        2.3.7 雜交瘤細(xì)胞的克隆化
        2.3.8 雜交瘤細(xì)胞的凍存
        2.3.9 雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇
        2.3.10 單克隆抗體的大量生產(chǎn)
        2.3.11 T-2毒素單克隆抗體腹水的純化
    2.4 實驗結(jié)果與分析
        2.4.1 免疫小鼠血清效價的測定結(jié)果
        2.4.2 雜交瘤細(xì)胞的篩選及克隆化
        2.4.3 單克隆抗體蛋白含量的確定
    2.5 本章小結(jié)
第3章 酶聯(lián)免疫吸附分析法檢測T-2毒素
    3.1 實驗試劑與儀器
        3.1.1 實驗主要試劑
        3.1.2 實驗主要儀器
        3.1.3 實驗所用溶液的配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 最佳抗原包被濃度的確定
        3.2.2 間接ELISA競爭操作步驟
        3.2.3 ELISA反應(yīng)體系的優(yōu)化
        3.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.2.5 樣品的加標(biāo)回收
    3.3 實驗結(jié)果與分析
        3.3.1 抗原包被濃度的確定
        3.3.2 抗體稀釋比例的確定
        3.3.3 酶標(biāo)二抗稀釋比例的確定
        3.3.4 甲醇濃度的確定
        3.3.5 pH的確定
        3.3.6 離子強(qiáng)度的確定
        3.3.7 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的建立
        3.3.8 樣品的加標(biāo)回收
    3.4 本章小結(jié)
第4章 化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫吸附分析法測定T-2毒素
    4.1 實驗試劑與儀器
        4.1.1 實驗主要試劑
        4.1.2 實驗主要儀器
        4.1.3 實驗所用溶液的配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 抗原包被濃度的確定
        4.2.2 間接ELISA競爭操作步驟
        4.2.3 CLEIA反應(yīng)體系優(yōu)化
        4.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        4.2.5 樣品的加標(biāo)回收
    4.3 實驗結(jié)果與分析
        4.3.1 抗原包被濃度的確定
        4.3.2 抗體稀釋比的確定
        4.3.3 酶標(biāo)二抗稀釋比的確定
        4.3.4 甲醇濃度優(yōu)化結(jié)果
        4.3.5 pH優(yōu)化結(jié)果
        4.3.6 離子強(qiáng)度優(yōu)化結(jié)果
        4.3.7 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的建立
        4.3.8 樣品的加標(biāo)回收
    4.4 本章小結(jié)
第5章 T-2毒素免疫親和柱-高效液相色譜法的建立
    5.1 實驗試劑與儀器
        5.1.1 實驗主要試劑
        5.1.2 實驗主要儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 色譜條件
        5.2.2 實驗所用溶液的配制
        5.2.3 樣品的凈化與洗脫
        5.2.4 衍生化
        5.2.5 樣品的加標(biāo)回收
        5.2.6 實際樣品的檢測
    5.3 實驗結(jié)果和分析
        5.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        5.3.2 樣品的加標(biāo)回收
        5.3.3 ELISA、C LEIA與 HPLC的方法學(xué)比較
        5.3.4 實際樣品中T-2毒素含量的檢測
    5.4 本章小結(jié)
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]谷物與飼料中T-2毒素免疫檢測技術(shù)研究[D]. 李靜.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[3]T-2毒素多克隆抗體的制備及其化學(xué)發(fā)光免疫檢測的初步研究[D]. 徐娟.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]T-2毒素對長沙黃雞免疫功能的毒性影響及其控毒試驗研究[D]. 袁莉蕓.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3526886