發(fā)布時間：2021-06-24 05:13

　　甾醇是煙氣中多環(huán)芳烴及苯并（a）芘的主要前體化合物之一,對煙草感官品質(zhì)和安全性起到負面影響。為降解煙草中的甾醇含量,提高卷煙安全性,本研究從煙草表面篩選可降解甾醇類化合物的微生物,以豆甾醇為降解模式反應(yīng),優(yōu)化微生物的降解條件,通過再造煙葉浸提液、煙絲發(fā)酵過程進行應(yīng)用驗證,實現(xiàn)煙草中植物甾醇的生物降解,從而達到降低煙氣中的稠環(huán)芳烴。為此,主要開展了如下幾方面的研究:（1）以豆甾醇為唯一碳源,從煙葉表面分離出了2株微生物,經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定,為類芽孢桿菌和甲基桿菌。對其中一株微生物類芽孢桿菌進行了生長及甾醇降解特性進行了研究,通過中心組合試驗設(shè)計（CCD）,得出了最佳降解工藝組合溫度40℃,pH值為6.53,豆甾醇濃度為2.15g/L,葡萄糖濃度6g/L,酵母粉濃度1g/L。獲得了一株可高效降解甾醇的微生物。（2）將類芽孢桿菌靜息細胞應(yīng)用于再造煙葉浸提液發(fā)酵發(fā)現(xiàn):在37℃,pH 7.0條件下采用對數(shù)期的細胞,浸提液中甾醇降解率為39.5%,再造煙葉中甾醇的降解率為36.5%,煙氣中苯并芘降低了31.7%。同時發(fā)現(xiàn),經(jīng)類芽孢桿菌的發(fā)酵后制備的再造煙葉的內(nèi)在品質(zhì)及感官質(zhì)量均有所提升。證明... 

【文章來源】：鄭州輕工業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

甾醇的結(jié)構(gòu)

研究的主要技術(shù)路線

第二章甾醇類降解菌株的篩選132.3.2菌株形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果將獲得的2種菌株進一步接種到種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后涂布于固體平板上，白色菌株在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)2d后，菌落光滑、飽滿、圓頂狀。菌落直徑1mm左右，菌落邊緣光滑，呈現(xiàn)白色，平板菌落如圖2-1（A）所示。紅色菌株培養(yǎng)3天后可以長出較為明顯的圓形菌落，菌落較為飽滿，略粗糙，菌落直徑為0.5mm左右，呈紅色，平板菌落如圖2-1（B）。利用甾醇作為唯一碳源，在固體平板培養(yǎng)基上對富集獲得的微生物進行篩選分離。因此，能夠在平板上存活的微生物可基本確定能利用甾醇作為碳源來維持細胞生長，作為備選的甾醇降解微生物。通過本實驗，在平板上分離到2種形狀的微生物單菌落，且相對均勻，無其他雜菌。這一結(jié)果說明煙草表面此類降解甾醇的微生物較少，同時這也是首次報道從煙草表面獲得甾醇降解菌。因此，挑選這兩種菌株的1-2個單菌落進行活化，并進一步在固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，用于后期的形態(tài)和分子鑒定。圖2-1微生物平板培養(yǎng)圖通過革蘭氏染色觀察細菌形狀，白色菌落微生物呈現(xiàn)桿狀，粉紅色菌落微生物也呈現(xiàn)桿狀，白色菌株為革蘭氏陽性菌，粉紅色菌株為革蘭氏陰性菌，大小在1-4μm間。結(jié)晶紫染色活體細胞，并于顯微鏡下觀察，結(jié)果如圖2-2。圖2-2兩種菌株鏡檢結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3246441