蟹類(lèi)水產(chǎn)品的消費(fèi)量逐年遞增,隨之引發(fā)的過(guò)敏反應(yīng)廣受關(guān)注。細(xì)絲蛋白C（filamin C,FLN c）是擬穴青蟹（Scylla paramamosain）肌肉中的新型過(guò)敏原,有關(guān)該過(guò)敏原的基因序列、理化特性、抗原表位等尚不清楚。因此針對(duì)FLN c基因序列及抗原表位的研究有利于解決甲殼類(lèi)動(dòng)物FLN c交叉反應(yīng)引起的過(guò)敏疾病診斷難題。本研究以擬穴青蟹FLN c為研究對(duì)象,利用巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)及互補(bǔ)脫氧核糖核酸末端快速擴(kuò)增技術(shù)獲得FLN c的基因序列,該基因開(kāi)放閱讀框共2544個(gè)堿基,編碼847個(gè)氨基酸殘基,核苷酸序列登錄號(hào)為MK747241.1,填補(bǔ)了甲殼類(lèi)水產(chǎn)品FLN c基因序列的空白。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,FLN c含有9個(gè)結(jié)構(gòu)域,其三級(jí)結(jié)構(gòu)呈免疫球蛋白樣折疊,具有典型的細(xì)絲蛋白家族特征;系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果表明,細(xì)絲蛋白家族在進(jìn)化中呈現(xiàn)高度保守性。另外,基于三種生物信息學(xué)在線(xiàn)分析及軟件預(yù)測(cè)得到FLN c的28個(gè)線(xiàn)性表位,并將本實(shí)驗(yàn)室前期經(jīng)噬菌體淘選獲得的模擬表位肽段與青蟹FLN c基因序列進(jìn)行比對(duì),共匹配得到22個(gè)表位肽段,比對(duì)分析最終明確了擬穴青蟹FLN c的11個(gè)線(xiàn)性表位。進(jìn)一步... 

【文章來(lái)源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號(hào)表
第1章 引言
    1.1 食物過(guò)敏與食物過(guò)敏原
        1.1.1 食物過(guò)敏現(xiàn)狀
        1.1.2 食物過(guò)敏反應(yīng)機(jī)制
        1.1.3 食物過(guò)敏原與組分診斷
    1.2 水產(chǎn)食物過(guò)敏原
        1.2.1 魚(yú)類(lèi)過(guò)敏原
        1.2.2 軟體貝類(lèi)過(guò)敏原
        1.2.3 甲殼類(lèi)過(guò)敏原
        1.2.4 水產(chǎn)食物過(guò)敏原的免疫交叉反應(yīng)
    1.3 水產(chǎn)食物過(guò)敏原抗原表位
        1.3.1 抗原表位的分類(lèi)與研究方法
        1.3.2 水產(chǎn)食物過(guò)敏原的抗原表位
    1.4 本研究的目的與意義
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 原材料
        2.1.2 甲殼類(lèi)過(guò)敏患者血清
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 擬穴青蟹FLN c的純化及鑒定
        2.2.2 擬穴青蟹FLN c的多克隆抗體制備
        2.2.3 擬穴青蟹FLN c的分子克隆
        2.2.4 擬穴青蟹FLN c的生物信息學(xué)分析
        2.2.5 擬穴青蟹FLN c的重組表達(dá)
        2.2.6 擬穴青蟹nFLN c與 rFLN c的性質(zhì)比較
        2.2.7 甲殼類(lèi)及軟體類(lèi)FLN c的免疫交叉反應(yīng)分析
        2.2.8 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 擬穴青蟹FLN c的純化鑒定及抗體制備
        3.1.1 FLN c的純化及質(zhì)譜鑒定
        3.1.2 FLN c的 Native-PAGE及雙向電泳分析
        3.1.3 FLN c的 PAS染色分析
        3.1.4 FLN c多克隆抗體制備及效價(jià)分析
    3.2 擬穴青蟹FLN c的分子克隆及生物信息學(xué)分析
        3.2.1 FLN c的分子克隆
        3.2.2 FLN c的氨基酸序列分析
        3.2.3 FLN c的二級(jí)結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)域分析
        3.2.4 FLN c的三級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        3.2.5 細(xì)絲蛋白家族系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
        3.2.6 FLN c的抗原表位分析
    3.3 擬穴青蟹FLN c的重組表達(dá)
        3.3.1 載體構(gòu)建及重組表達(dá)
        3.3.2 重組蛋白的純化及鑒定
    3.4 擬穴青蟹n FLN c與 rFLN c的比較分析
        3.4.1 理化特性的比較分析
        3.4.2 二級(jí)結(jié)構(gòu)及表面疏水性的比較分析
        3.4.3 免疫結(jié)合活性的比較分析
    3.5 擬穴青蟹FLN c的結(jié)構(gòu)域重組蛋白表達(dá)及表位區(qū)域分析
        3.5.1 FLN c不同結(jié)構(gòu)域的載體構(gòu)建及原核表達(dá)
        3.5.2 FLN c不同結(jié)構(gòu)域重組蛋白的純化及鑒定
        3.5.3 FLN c不同結(jié)構(gòu)域重組蛋白的免疫結(jié)合活性分析
    3.6 甲殼類(lèi)及軟體類(lèi)FLN c的免疫交叉反應(yīng)分析
        3.6.1 甲殼類(lèi)及軟體類(lèi)FLN c的 IgG結(jié)合活性分析
        3.6.2 甲殼類(lèi)及軟體類(lèi)FLN c的 IgE結(jié)合活性分析
        3.6.3 甲殼類(lèi)及軟體類(lèi)FLN c的抑制性Western blot分析
第4章 討論
    4.1 擬穴青蟹FLN c的分子克隆及生物信息學(xué)分析
    4.2 擬穴青蟹nFLN c與 rFLN c的性質(zhì)比較
    4.3 擬穴青蟹FLN c的抗原表位區(qū)域分析
    4.4 甲殼類(lèi)及軟體類(lèi)FLN c的免疫交叉反應(yīng)分析
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
在學(xué)期間科研成果情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[8]生物信息學(xué)技術(shù)在食物過(guò)敏原表位預(yù)測(cè)中的應(yīng)用[J]. 龍偉,李欣,高金燕,陳紅兵.  食品科學(xué). 2014(03)
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博士論文
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本文編號(hào)：3229776