發(fā)布時(shí)間：2020-10-17 19:42

　　 皮蛋,又名松花蛋,是由中國(guó)首創(chuàng)的傳統(tǒng)風(fēng)味蛋制品,以其清香可口,方便食用等特點(diǎn)受到廣大消費(fèi)者的喜愛(ài)。除了皮蛋絕佳的食用性,皮蛋固有的禽蛋特質(zhì)和其特殊的加工工藝賦予其更多營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和功效。中醫(yī)認(rèn)為,皮蛋性寒涼,具有清熱降火的功效�！吧匣稹币辉~源于中醫(yī)的專業(yè)術(shù)語(yǔ),現(xiàn)已廣泛的運(yùn)用于人們的日常生活中,其臨床表現(xiàn)主要為一系列輕微且反復(fù)的疾病�！吧匣稹钡木唧w成因和機(jī)制尚不清楚,但研究表明,與上火相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)有很多,其中氧化應(yīng)激以及炎癥與其具有重要的關(guān)聯(lián)。目前,對(duì)于皮蛋營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和功效研究還較為薄弱,基于此,本文通過(guò)細(xì)胞、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)皮蛋清熱降火以及抗炎功效進(jìn)行研究,以期為后續(xù)皮蛋中有效成分的探究奠定基礎(chǔ),并為皮蛋相關(guān)的功能產(chǎn)品提供相應(yīng)的理論依據(jù)。主要的研究結(jié)果如下:(1)通過(guò)建立LPS誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞炎癥模型,對(duì)比了皮蛋全蛋(DWPE)、蛋清(DPEW)和蛋黃(DPEY)模擬胃腸道消化產(chǎn)物的抗炎效果。結(jié)果表明,LPS刺激炎癥模型建立成功后,RAW264.7細(xì)胞活性顯著升高,DWPE對(duì)LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞活性的異常增加有一定的抑制作用,可能通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞活性來(lái)發(fā)揮抗炎活性。DWPE、DPEW和DPEY對(duì)細(xì)胞中NO含量的增加有顯著的下調(diào)作用。其中DPEW和DPEY效果更為顯著。同時(shí),各濃度的DPEW對(duì)TNF-α、IL-6含量具有最佳的下調(diào)作用。DPEW和DPEY則對(duì)COX-2和iNOS的mRNA表達(dá)均有顯著的下調(diào)作用并成劑量依賴的規(guī)律。通過(guò)對(duì)比,皮蛋蛋清(DPEW)模擬胃腸道消化產(chǎn)物的抗炎效果最佳。(2)探究了DPEW在RAW264.7細(xì)胞中發(fā)揮抗炎作用的機(jī)理。結(jié)果表明DPEW可以抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng),抑制炎癥介質(zhì)NO和促炎癥細(xì)胞因子IL-1β的大量分泌,顯著下調(diào)TRL4和P65 mRNA的大量表達(dá)。DPEW還可以抑制由LPS誘導(dǎo)的IκB、ERK和JNK蛋白的磷酸化,顯著阻止P65蛋白的核轉(zhuǎn)移,從而抑制NF-κB和MAPK通路的激活,發(fā)揮抗炎的功效。(3)探究了DPEW體外抗氧化能力以及對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明,DPEW具有顯著的DPPH、OH·自由基清除能力,DPEW對(duì)自由基的清除能力呈現(xiàn)出劑量依賴。其中,DPEW對(duì)DPPH自由基清除效果顯著優(yōu)于0.5 mg/mL VC;DPEW對(duì)OH·自由基的清除率可達(dá)0.5 mg/mL VC的一半。同時(shí),DPEW對(duì)三價(jià)鐵離子具有顯著的還原能力,隨著濃度的增加呈現(xiàn)出劑量依賴,還原能力可達(dá)0.5 mg/mL VC的一半。在細(xì)胞模型中,DPEW對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用:不同濃度的DPEW對(duì)RAW264.7細(xì)胞中SOD活性出現(xiàn)不同程度的上調(diào)作用,其中,上調(diào)SOD活性可達(dá)損傷模型組的2倍;類似的,不同濃度的DPEW處理后,RAW264.7細(xì)胞中GSH含量也出現(xiàn)了不同程度的上調(diào);NO含量出現(xiàn)不同程度的下調(diào),隨著DPEW濃度的升高,細(xì)胞中NO含量的協(xié)調(diào)呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系;與此同時(shí),RAW264.7細(xì)胞中GSH-px mRNA表達(dá)量表現(xiàn)出不同程度的上調(diào)。由此可見(jiàn),DPEW具有良好的抗氧化功效。(4)探究了皮蛋蛋清對(duì)促進(jìn)口腔潰瘍大鼠恢復(fù)中發(fā)揮的作用。結(jié)果表明,皮蛋蛋清可以顯著減輕大鼠口腔潰瘍模型中局部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度,黏膜結(jié)構(gòu)有所恢復(fù),空泡減少,組織結(jié)構(gòu)重塑,緩解了口腔潰瘍局部破潰和充血水腫的情況,縮小口腔潰瘍面積,增加了PCNA表達(dá)陽(yáng)性程度,促進(jìn)愈合。同時(shí),皮蛋蛋清可以對(duì)口腔潰瘍大鼠血清中的TNF-α、IL-6含量均有顯著的下調(diào)作用,對(duì)TNF-α和IL-6基因表達(dá)的上調(diào)有不同程度的抑制作用,對(duì)MDA含量及SOD活力有不同程度的調(diào)節(jié)作用,具有良好的抗炎和抗氧化作用,發(fā)揮了“清熱降火”的作用。
【學(xué)位單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS253.4
【部分圖文】：

反應(yīng)條件：50℃ 2 min，95℃ 10 min；95℃ 30 sec ，60℃ 30 sec，40 cycles，溶解曲線。.6 數(shù)據(jù)處理描述性統(tǒng)計(jì)和方差分析用 IBM SPSS Statistics 21 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)均值±方差（x±s）表示，P<0.05 則為統(tǒng)計(jì)學(xué)上存在顯著性差異，用 GraphPadm 軟件作圖。果與分析 細(xì)胞活性的測(cè)定205bpReverse 5‘- TCAGGGATGTGAGGAGGGTA-3’Mus INOS Forward 5‘- TTGGCTCCAGCATGTACCCT-3’121bpReverse 5‘- TCCTGCCCACTGAGTTCGTC-3’

皮蛋清熱降火和抗炎功效的研究和 DPEY 下培養(yǎng) 24 小時(shí)后，RAW264.7 細(xì)胞的活性相較于空白對(duì)照組的細(xì)胞活沒(méi)有顯著的抑制作用。證明在濃度 10-500 μg/mL 范圍內(nèi)，DWPE、DPEW 和 D對(duì) RAW264.7 細(xì)胞沒(méi)有明顯的細(xì)胞毒性，可以運(yùn)用以上濃度繼續(xù)進(jìn)行下一步的實(shí)2.2 脂多糖誘導(dǎo)的細(xì)胞活性的測(cè)定

圖 2-2. DWPE（A）、DPEW 和 DPEY（B）對(duì) LPS 誘導(dǎo)的細(xì)胞活性的影響Fig.2-2 The effect of DWPE（A）, DPEW and DPEY（B）on LPS-stimulated cell viability注：字母相同表示差異不顯著(P > 0.05)；字母不同表示差異顯著(P < 0.05)。由圖 2-2 可知，經(jīng)過(guò) LPS 刺激后，細(xì)胞活性均有顯著的增加(P<0.05)，增加可達(dá) 50%-200%，證明細(xì)胞炎癥構(gòu)建成功，同時(shí)圖 A 中 10、50 和 100 μg/mLDW樣品對(duì) LPS 誘導(dǎo)的 RAW264.7 細(xì)胞活性的異常增加有顯著的的抑制作用，可抑制胞活性異常增加的 25%-50%。2.3 一氧化氮（NO）測(cè)定
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