赭曲霉毒素A是一種分布較廣的真菌毒素,主要污染谷物、動物飼料和動物性食品,具有較強的毒性和致癌、致畸、致突變的作用。目前關于赭曲霉毒素A的檢測方法有很多,但大都存在檢測成本高、儀器不便攜、不適用于即時檢測、樣品前處理復雜等問題。雖然,紙層析檢測的成本相比較于儀器分析檢測的成本要低,但存在著試劑用量大、飽和層析時間長、分子探針固定量比較少、多重檢測時分子量有限等不足。因此,開發(fā)一種既具有紙層析檢測時的優(yōu)勢外還可以彌補其不足的替代物就顯得尤為重要。本文通過實驗室制備的微流控平臺,采用自組裝方法制備得出不同粒徑的蛋白石光子晶體微球。自主設計了 4種不同形狀的玻璃毛細管分別與蛋白石光子晶體微球相結合的微器件,利用毛細作用,形成自動進樣與檢測的一體化設計。首先對于微球的制備采用實驗室原先探索出的改進的Stober方法,利用油相與水相流速的不同可以制備出不同粒徑的微球,最終得到當油相流速為10 mL/h水相流速為35 mL/h時放入內(nèi)徑為0.5 mm的玻璃毛細管中最為合適。其次將微球與4種不同形狀的玻璃毛細管相結合形成4種不同的微器件,利用金相顯微鏡對其表征,就進樣時間、進樣量等對其進行了分析,篩選出兩種微器件進行后續(xù)的實驗。最后本文還對蛋白石光子晶體微球毛細管器件制備過程中最適的條件進行探索以及影響微球熒光信號的干擾因素進行分析。本文建立了基于蛋白石光子晶體微球的毛細管器件的制備與結合核酸適配體熒光檢測技術進行赭曲霉毒素A的定性、定量檢測的方法。將制備得到的光子晶體微球進行表面化學修飾連接相應的功能性基團,并與已連接Cy3熒光基團的核酸適配體進行偶聯(lián),利用赭曲霉毒素A與核酸適配體相對應的互補鏈一起競爭適配體反應所引起的熒光信號變化進行檢測,并對競爭反應過程中幾個關鍵條件進行優(yōu)化。實驗得出:適配體最適濃度為600nmol/L,互補鏈最適濃度為15 μmol/L,反應最適溫度為45℃C,反應時間為1.5 h。分別得出了蛋白石光子晶體微球毛細管器件1的標準曲線方程為 y=-7.775471gX+70.59418,R2=0.99517,最低檢測限為 0.4 ng/mL,其線性檢測范圍:1 ng/mL-100 ng/mL。蛋白石光子晶體微球毛細管器件2的標準曲線為y=-7.022061gX+71.77908,R2=0.99256,最低檢測限為 0.1 ng/mL,其線性檢測范圍:1 ng/mL-100 ng/mL。并檢測了兩種器件的特異性,結果表明本器件具有特異性,與赭曲霉毒素B、黃曲霉毒素A1、伏馬毒素B1、玉米赤霉烯酮毒素無明顯交叉反應。之后,我們又與傳統(tǒng)的ELISA作了對比分析,分別檢測了大米、小麥、玉米這三種谷物中OTA的加標回收率,蛋白石光子晶體微球細細管器件1的總體回收率為59.99±8.64%～78.74±8.64%,蛋白石光子晶體微球毛細管器件2的總體回收率為84.95±10.31%～108.11±7.00%,從回收率可以看出器件2相較于器件1而言更具有優(yōu)勢。
【學位單位】：南京師范大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：TS207.4
【部分圖文】：

圖１．２不同維度的光子晶體１６４）逡逑

Ｓｉ（ＯＲ）４邋＋邋４Ｈ２０邋Ｓｉ（ＯＨ＼邋－ｆ邋＼ＲＯＨ逡逑ｎＳｉ（ＯＨ＼邋－＞邋ｎＳｉ０２邋＋邋２ｎＨ２0逡逑傳統(tǒng)Ｓｔ６ｂｅｒ法制備流程如圖１．３所示一般先將氨水、水和乙醇放置于磁力攪逡逑拌器上進性混勻，混勻后繼續(xù)攪拌，反應２ｈ后，離心并清洗混合液，從而得到逡逑ＳｉＣｈ微球反應的具體過程為：ＴＥＯＳ首先水解生成Ｓｉ（ＯＨ）４單體，然后縮合逡逑成可溶性縮合物。在布朗運動的作用下，可溶性縮合物之間會相互團聚，進一步逡逑縮合為不穩(wěn)定的微晶核。與此同時，可溶性的縮合物還可在大顆粒的表面進行生逡逑長，而體積較大的微晶核可以進一步團聚形成更大顆粒。逡逑Ａ逡逑堿，液邐口口口逡逑醇溶液邋／邐＼邋ＴＥＯＳ、醇溶液邋／邋＼邐石茲力彟邐／邋＼逡逑圖１．３（ａ）傳統(tǒng)Ｓｔ６ｂｅｒ法制備反應流程圖逡逑Ｆｉｇ．邋１．３（ａ）邋Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ邋Ｓｔ６ｂｅｒ邋ｍｅｔｈｏｄ邋ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ邋ｒｅａｃｔｉｏｎ邋ｆｌｏｗ邋ｃｈａｒｔ逡逑１０逡逑

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【參考文獻】

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1 景悅林;張琪;郭坤平;張浩;魏斌;;低維納米光子晶體的制備及在有機激光諧振腔的應用[J];功能材料;2014年23期

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3 王穎;張妮娜;雒麗娜;段鶴君;劉杰;;赭曲霉毒素A檢測方法的研究進展[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2014年05期

4 周之燕;王秀峰;師杰;江紅濤;;自組裝法制備聚苯乙烯光子晶體的研究進展[J];材料導報;2010年21期

5 高永芳;;光子晶體及其自組裝制備方法的進展[J];紅外;2010年04期

6 丁濤;劉占芳;宋愷;;三維光子晶體的制備[J];化學進展;2008年09期

7 楊家玲;岳田利;高振鵬;相啟森;;赭曲霉毒素A檢測方法的研究進展[J];農(nóng)產(chǎn)品加工(學刊);2008年06期

8 章英;許楊;;谷物類食品中赭曲霉毒素A分析方法的研究進展[J];食品科學;2006年12期

9 王艷平;朱永政;陳洪波;曹艷玲;池元斌;;光子晶體及其自組裝制備[J];光電子技術與信息;2006年03期

10 李鳳琴;赭曲霉毒素A分析方法進展[J];中國食品衛(wèi)生雜志;2004年06期

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3 陸冰睿;納米光刻技術在納米光子晶體、超材料和生物學中的應用[D];復旦大學;2010年

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4 幸佳賓;Stober法制備二氧化硅微球工藝研究[D];西安電子科技大學;2015年

5 蘭小波;光子晶體的自組裝制備及應用研究[D];天津大學;2015年

6 龔超;電場結合毛細作用力誘導有機微納晶體圖案化排列及其光電探測器件研究[D];蘇州大學;2015年

7 賀貞云;赭曲霉毒素A模擬表位二級庫的構建及其全抗原的生物合成[D];南昌大學;2014年

8 姚金燕;單分散納米微球的合成及膠體光子晶體薄膜的制備[D];揚州大學;2014年

9 侯飛;量子點免疫層析試紙條同步定量檢測血液傳染病三種指標的研究[D];電子科技大學;2014年

10 耿霞;基于核酸適配體熒光法檢測赭曲霉素A[D];山西大學;2013年

本文編號：2833520