【摘要】：氧化反應(yīng)是生物體在新陳代謝過程中常發(fā)生的活動(dòng),活性氧(ROS)和活性氮(RN)作為其主要產(chǎn)物,在生理功能中起著雙重作用�；瘜W(xué)修飾的抗氧化劑對(duì)人體構(gòu)成潛在危害而存在使用限制,所以從動(dòng)植物中獲取具有較高安全性和較高活性的天然抗氧化物質(zhì),對(duì)機(jī)體提高自身抗氧化能力具有重要意義。河蜆是一種雙殼貝類,廣泛分布于我國(guó)內(nèi)陸水域,具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。本文通過分離純化技術(shù)提取河蜆中抗氧化肽,并進(jìn)一步研究其對(duì)化學(xué)急性肝損傷的保護(hù)作用。研究結(jié)果如下:首先以河蜆軟體為原料,對(duì)其營(yíng)養(yǎng)成分及營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)進(jìn)行了比較和分析。結(jié)果表明:河蜆軟體部分水分含量為86.64%,干樣品中粗蛋白、粗脂肪以及灰分含量分別為62.80%、11.67%和4.82%。樣品中有17種氨基酸(557.87 mg/g),氨基酸種類齊全,其中6種必需氨基酸(206.77 mg/g),占氨基酸總量的37.06%,且必需氨基酸與氨基酸總量構(gòu)成比例達(dá)到國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)要求。河蜆軟體中還含有較豐富的礦物質(zhì),尤其是Cu和Zn元素均高于常見貝類。綜上所述河蜆是一種具有較高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的軟體動(dòng)物。通過對(duì)多肽獲得率、水解度和DPPH自由基清除能力的測(cè)定,確定胰蛋白酶為河蜆的最佳水解酶。以DPPH自由基清除能力作為評(píng)價(jià)指標(biāo),進(jìn)行水解單因素實(shí)驗(yàn)并通過響應(yīng)面優(yōu)化工藝參數(shù)。最終得到最優(yōu)酶解條件為:酶解溫度45℃、pH值7.5、料液比(w/v)1:7.5和酶加量2020 U/g。在此條件下得到的酶解液DPPH自由基的清除率達(dá)到62.22%。河蜆軟體水解后,通過超濾系統(tǒng)將多肽分成10 ku、10 ku-5 ku、5 ku三個(gè)組分,結(jié)果表明5 ku的多肽組分體外抗氧化活性最強(qiáng)。采用Sephadex G-25凝膠層析對(duì)分子量小于5 ku的河蜆多肽進(jìn)一步分離,獲得Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ四組分,通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)得出組分Ⅰ具有最強(qiáng)的保護(hù)HepG-2細(xì)胞免受H_2O_2氧化損傷能力,然后利用DEAE陰離子交換層析將組分Ⅰ分為九個(gè)組分,其中F_(Ⅰ-3)具有最強(qiáng)的DPPH自由基清除能力,最終利用RP-HPLC純化得到目標(biāo)多肽X。通過質(zhì)譜分析得其分子量為988.3 u,氨基酸序列為KGPAPFYPL。最后,利用CCl_4構(gòu)建小鼠化學(xué)急性肝損傷模型,研究小分子河蜆肽在增強(qiáng)小鼠抗氧化防御系統(tǒng)、抑制促炎癥反應(yīng)和肝細(xì)胞凋亡方面的作用。結(jié)果表明,小分子肽對(duì)小鼠無毒害作用,并且能夠降低肝臟指數(shù)、提高脾臟指數(shù),減少血清中ALT和AST含量,提高肝臟中SOD和CAT含量,減少M(fèi)DA含量。通過HE染色、免疫組化實(shí)驗(yàn)和TUNEL染色觀察,小分子多肽能夠明顯改善肝臟組織損傷,減少炎癥因子的生成,同時(shí)抑制化學(xué)損傷導(dǎo)致的肝細(xì)胞凋亡。綜上所述,小分子多肽具有保護(hù)肝臟的作用。
【圖文】：

建立小鼠化學(xué)急性肝損傷模型，研究河蜆軟體小分子多肽對(duì)肝損傷的保護(hù)作用河蜆?biāo)幱煤凸δ苄允称返拈_發(fā)提供理論依據(jù)。.4.2 主要研究?jī)?nèi)容首先對(duì)河蜆軟體基本營(yíng)養(yǎng)成分（水分、蛋白質(zhì)、脂肪、灰分）和礦物質(zhì)進(jìn)行定，并與多種常見淡水和海洋貝類進(jìn)行分析比較。同時(shí)對(duì)河蜆軟體氨基酸種類含量進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)氨基酸品質(zhì)進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。以短肽獲得率、水解度以及 DPPH 自由基清除能力作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選出河蜆體最適水解酶。通過單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面優(yōu)化獲得最佳酶解條件。以體外抗氧化能力以及 H2O2氧化損傷 HepG-2 細(xì)胞模型作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通濾系統(tǒng)、凝膠層析、陰離子交換層析和 RP-HPLC 逐步分離純化，最終獲得目分子多肽，并對(duì)目標(biāo)多肽分子量和氨基酸組成進(jìn)行測(cè)定。建立 CCl4致小鼠化學(xué)急性肝損傷模型，從增強(qiáng)小鼠抗氧化防御系統(tǒng)，抑制炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡方面，研究小分子河蜆軟體多肽對(duì)小鼠肝損傷的保護(hù)作。

短肽獲得率、水解度和 DPPH 自由基清除率三個(gè)指標(biāo)確定最解時(shí)間、水解溫度、pH、酶加量和料液比五個(gè)單因素實(shí)驗(yàn)前提實(shí)驗(yàn)，以 DPPH 自由基清除率為指標(biāo)確定最優(yōu)酶解條件。分析劑篩選同酶水解河蜆的短肽獲得率和水解度 3.1 可知，胰蛋白酶水解物的短肽獲得率為 42.94%，在相同量的情況下，其短肽獲得率明顯高于其他蛋白酶水解物（P<0.更適合于河蜆軟體的水解。從水解度來看，胰蛋白酶具有較強(qiáng)），，這個(gè)結(jié)果與 Gbogouri 等人[75]研究酶解鮭魚頭部的蛋白質(zhì)力、乳液穩(wěn)定性以及 Klompong 等人[76]通過研究不同種類酶蛋白以獲取最優(yōu)抗氧化活性和功能特性相似。這可能是因?yàn)橐葟?qiáng)酶并且具有最強(qiáng)的水解能力，能夠充分發(fā)揮酶解作用，水解主要由小分子肽組成。
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：TS254.1

【參考文獻(xiàn)】

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4 董金和;;《2013中國(guó)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒》解讀[J];中國(guó)水產(chǎn);2013年07期

5 王艷梅;萬全;賴年悅;林琳;葉應(yīng)旺;姜紹通;陸劍鋒;;黃緣盒龜肉的酶解工藝優(yōu)化及其體外抗氧化活性研究[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2013年04期

6 楊鋒;陳錦屏;林心怡;;美拉德反應(yīng)對(duì)醋蛋多肽抗氧化活性的影響[J];食品科學(xué);2013年03期

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本文編號(hào)：2659032