表皮生長因子受體(EGFR),在多數(shù)實體瘤中廣泛存在,因其過表達(dá)與實體瘤的生長以及轉(zhuǎn)移密切相關(guān),被稱為癌癥的必需生物標(biāo)志物。西妥昔單抗為應(yīng)用最廣泛的EGFR抗體,與幾種同是治療結(jié)直腸癌以及頭頸癌等與EGFR過表達(dá)有關(guān)癌癥的抗體,均因尺寸大這一弊端大大影響了其在臨床應(yīng)用中的治療效率。人源化單鏈抗體(huscFv)顯著的優(yōu)點就是分子量小,具有較強的穿透力,因其人源化還可以消除一部分鼠抗的免疫原性。本課題以EGFR抗體西妥昔單抗為基礎(chǔ),在其結(jié)構(gòu)上選取VH和VL片段以短肽鏈Linker連接為單鏈抗體主要結(jié)構(gòu),選取實驗室已研究出的成熟的抗腫瘤多肽ZXR-2,以Linker連接,設(shè)計并合成了 EGFR與抗腫瘤肽ZXR-2融合的蛋白(huscFv-ZXR-2)的氨基酸序列,并反向翻譯得到核苷酸序列,對于序列進行人源化優(yōu)化,使得蛋白可以在大腸桿菌中表達(dá),以未連接ZXR-2的人源化單鏈抗體huscFv為對照。通過基因工程的方法對這兩個片段進行酶切,連接,誘導(dǎo)表達(dá)以及純化,并對誘導(dǎo)表達(dá)以及純化過程中的操作參數(shù)進行優(yōu)化篩選,獲得蛋白表達(dá)量以及純度最高的實驗參數(shù)。然后優(yōu)化蛋白的復(fù)性條件以提高蛋白表達(dá)的回收率。...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

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?ＹＹ８Ａ??＆?１ＹＹ８Ｂ），以西妥昔單抗的這兩個片段為基礎(chǔ)框架設(shè)計了??ＶＬ－Ｌｉｎｋｅｒ－ＶＨ－Ｌｉｎｋｅｒ－ＭＭＰ２酶切位點－ＺＸＲ－２這樣的氨基酸序列，其中Ｌｉｎｋｅｒ??為甘氨酸－絲氨酸連接而成，具體序列為ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ，共１５個氨基酸??首尾相接而成，....

圖２－３?ｈｕｓｃＦｖ序列示意圖??Ｆｉｇ．?２－３?Ｔｈｅ?ｈｕｓｃＦｖ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｄｉａｇｒａｍ??

?北京化工大學(xué)碩士學(xué)位論文?????Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ?ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ?ｓｃｆｖ?ｇｅｎｅ??ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ??ＬＩＮＫＥＲ??ｙ??Ｔ７ｔｅｒ?／?Ｔ７ｐｒ??Ｋａｎ’?ｇｅｎｅ?Ｕ?ＰＥＴ－２８ａ?■?Ｌａｃｌ??圖２－３?ｈｕｓｃＦｖ序列示意圖??Ｆｉｇ....

圖２－５?ＤＮＡ瓊脂糖凝膠電泳圖??Ｆｉｇ．２－５?ＤＮＡ?ａｇａｒ?ｓｕｇａｒ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??

?北京化工大學(xué)碩士學(xué)位論文???２．４．２目的基因的擴堪??將公司合成完成的菌株進行挑菌涂板提質(zhì)粒之后，進行瓊脂糖跑膠，結(jié)果如下??圖?２－５：??Ｍａｒｋｅｒ?ｈｕｓｃｆｖ?ｈｏｓｃｆｖ?ＺＸＫ２；??ｍｍｒｎｍ??圖２－５?ＤＮＡ瓊脂糖凝膠電泳圖??Ｆｉｇ．２－５?ＤＮＡ?ａ....

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