發(fā)布時間：2023-11-18 10:49

　　骨關節(jié)炎是一種關節(jié)軟骨的退行性疾病。諸多因素均可引起關節(jié)軟骨變性和丟失,繼而導致關節(jié)邊緣和軟骨下骨骨質再生并引發(fā)滑膜炎癥。骨關節(jié)炎是常見的致殘疾病,發(fā)病率高,嚴重威脅著人類的健康和生活。尚無有效的方式治療骨關節(jié)炎,臨床上主要通過藥物治療(口服或關節(jié)腔注射)來緩解骨關節(jié)炎的癥狀,但并不能從根本上修復骨關節(jié)炎的軟骨損傷。目前,骨關節(jié)炎的基因治療受到了廣泛關注,其可以通過調節(jié)相關基因的表達而促進軟骨修復。此外,與單一療法相比,聯(lián)合治療的方式可以起到增強療效的作用。因此,將基因和藥物聯(lián)合應用來治療骨關節(jié)炎可為骨關節(jié)炎的治療提供新思路。氯諾昔康是一種新型的非甾體類抗炎藥,主要通過發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用來治療骨關節(jié)炎。MicroRNA-140是一種小的非編碼RNA,可以通過調節(jié)與骨關節(jié)炎相關基因的表達,從而促進軟骨修復。將氯諾昔康和microRNA-140聯(lián)合應用可達到消除炎癥和修復軟骨損傷的雙重目的。但microRNA難入胞且容易被核酸酶降解,仍需尋求合適的microRNA遞送載體來克服microRNA應用的瓶頸。金納米粒是直徑為1～100nm的金的締合膠體,具有很多優(yōu)良的性質,是常用的基因遞送載體。...

【文章頁數】：78 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號說明
前言
第1章 AuNPs/miR-140復合物的制備及表征
    1. 實驗材料
        1.1 試藥
        1.2 儀器
    2. 實驗方法
        2.1 主要溶液的配制
            2.1.1 氯金酸溶液
            2.1.2 PEI溶液
            2.1.3 10×TAE電泳緩沖液
            2.1.4 MiR-140濃儲液
        2.2 AuNPs的制備
            2.2.1 AuNPs的初步制備方法
            2.2.2 PEI體積對AuNPs制備的影響
            2.2.3 反應溫度對AuNPs制備的影響
            2.2.4 反應時間對AuNPs制備的影響
        2.3 AuNPs的表征
            2.3.1 外觀性狀及微觀形態(tài)
            2.3.2 粒徑及電位分布
        2.4 AuNPs/miR-140復合物的制備
            2.4.1 復合物的制備
            2.4.2 復合物最佳質量比(W/W=Au/miR-140)的篩選
                2.4.2.1 瓊脂糖凝膠阻滯電泳
                2.4.2.2 粒徑及電位分布
        2.5 金納米粒/miR-140復合物的穩(wěn)定性實驗
            2.5.1 肝素提取實驗
            2.5.2 復合物在RNA酶A中的穩(wěn)定性實驗
    3. 實驗結果與分析
        3.1 AuNPs的制備
            3.1.1 PEI體積對AuNPs制備的影響
            3.1.2 反應溫度對AuNPs制備的影響
            3.1.3 反應時間對AuNPs制備的影響
        3.2 AuNPs的表征
            3.2.1 AuNPs的外觀性狀及微觀形態(tài)
            3.2.2 AuNPs的粒徑及電位分布
        3.3 AuNPs/miR-140復合物的最佳質量比的篩選
            3.3.1 AuNPs/miR-140復合物的瓊脂糖凝膠阻滯電泳
            3.3.2 不同質量比的AuNPs/miR-140復合物的粒徑及電位分布
        3.4 穩(wěn)定性實驗結果
            3.4.1 肝素提取實驗結果
            3.4.2 復合物在RNA酶A中的穩(wěn)定性實驗結果
    4. 討論
    5. 結論
第2章 AuNPs /miR-140復合物的體外評價
    1. 實驗材料
        1.1 試藥
        1.2 儀器
        1.3 細胞
    2. 實驗方法
        2.1 主要溶液的配制
            2.1.1 MTT溶液
            2.1.2 細胞實驗用磷酸鹽緩沖液(PBS)
        2.2 細胞毒性實驗
        2.3 細胞轉染實驗
            2.3.1 熒光顯微鏡觀察
            2.3.2 流式細胞儀測定
        2.4 qPCR測定miR-140以及COL2A mRNA的相對表達
            2.4.1 總RNA的提取步驟
            2.4.2 MiR-140的逆轉錄步驟
            2.4.3 總RNA的逆轉錄步驟
            2.4.4 實時熒光定量PCR反應步驟
        2.5 統(tǒng)計分析
    3. 結果與分析
        3.1 細胞毒性實驗結果
        3.2 細胞轉染實驗結果
            3.2.1 熒光顯微鏡觀察結果
            3.2.2 流式細胞儀檢測結果
        3.3 qPCR測定miR-140和COL2A mRNA的表達
            3.3.1 qPCR測定miR-140的表達
            3.3.2 qPCR測定COL2A mRNA的表達
    4. 討論
    5. 結論
第3章 Lnxc和miR-140聯(lián)合治療OA的藥效學研究
    1. 實驗材料
        1.1 試藥
        1.2 儀器
        1.3 動物
    2. 實驗方法
        2.1 主要溶液的配制
            2.1.1 1%木瓜蛋白酶和0.03M的半胱氨酸混合溶液
            2.1.2 Lnxc-sol
        2.2 大鼠膝關節(jié)OA模型的建立
        2.3 實驗方案設計
            2.3.1 分組
            2.3.2 給藥方案
        2.4 藥效學評價指標的觀察與測定
            2.4.1 軟骨的外觀觀察
            2.4.2 軟骨和滑膜的組織學評價
                2.4.2.1 股骨踝、脛骨平臺和滑膜等組織的處理
                2.4.2.2 HE染色
                2.4.2.3 番紅O-固綠染色
                2.4.2.4 軟骨和滑膜的組織病理學評分
        2.5 統(tǒng)計分析
    3. 結果與分析
        3.1 大鼠體重和膝寬的測定結果
        3.2 大鼠股骨踝和脛骨平臺外觀觀察結果
        3.3 軟骨和滑膜的組織學評價結果
            3.3.1 股骨踝和脛骨平臺切片的HE染色結果
            3.3.2 滑膜切片的HE染色結果
            3.3.3 股骨踝和脛骨平臺切片的番紅O-固綠染色結果
        3.4 軟骨和滑膜的組織病理學評分
            3.4.1 股骨踝和脛骨平臺的Mankin評分
            3.4.2 滑膜的組織病理學評分
    4. 討論
    5. 結論
總結與展望
參考文獻
致謝
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本文編號：3865137