發(fā)布時間：2023-11-04 11:30

　　拮抗酵母作為果實采后重要的生物防治拮抗微生物,在取代或降低化學(xué)殺菌劑使用量,保證人體及動物健康、減小對環(huán)境污染等方面具有廣闊的前景。但目前普通的拮抗菌很難達到甚至接近化學(xué)殺菌劑的抑菌效果,利用遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)定向改造拮抗酵母可有效提高其生防效力。本論文以Rho1蛋白和Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1三種抗菌肽為研究對象,通過其分別在釀酒酵母和畢赤酵母GS115菌株中的穩(wěn)定遺傳及表達;探究重組釀酒酵母rho1基因的過表達對CWI信號通路的影響以及對梨果實病害的防治效果,并揭示相關(guān)的抑菌機理;初步研究Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1三種抗菌肽重組畢赤酵母菌株的抑菌效果,同時對抗菌肽等外源基因轉(zhuǎn)化非常規(guī)酵母(羅倫隱球酵母)的可能性進行探究。主要研究結(jié)論如下:1、重組釀酒酵母SC/rho1經(jīng)過半乳糖誘導(dǎo)培養(yǎng)后rho1基因能實現(xiàn)穩(wěn)定高效表達,同時對重組酵母細胞壁多糖組分分析顯示:半乳糖誘導(dǎo)后重組酵母葡聚糖和幾丁質(zhì)在細胞壁中含量較野生型酵母顯著上升,說明Rho1作為主調(diào)節(jié)因子,能顯著激活CWI信號通路中參與細胞壁合成和肌動蛋白重排相關(guān)的基因(Pkc1、Fks1、Fks2、C...

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
簡寫詞對照表(Abbreviatiolls)
第一章 文獻綜述
    1.1 前言
    1.2 微生物防治
        1.2.1 營養(yǎng)與空間競爭
        1.2.2 誘導(dǎo)果實產(chǎn)生抗性
        1.2.3 重寄生作用
        1.2.4 分泌胞外水解酶等活性物質(zhì)
    1.3 遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)定向改造酵母
    1.4 抗菌肽的研究進展及概述
        1.4.1 抗菌肽的作用機理
        1.4.2 抗菌肽在病害防治中的應(yīng)用前景
    1.5 細胞壁完整性信號通路(CWI)和Rho1蛋白概述
        1.5.1 細胞壁完整性信號通路(CWI)
        1.5.2 Rho1蛋白功能
    1.6 本課題的研究意義及主要內(nèi)容
第二章 重組釀酒酵母rho1基因表達及其對CWI信號通路的影響
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 實驗儀器
        2.2.2 培養(yǎng)基與酵母菌株
        2.2.3 試驗試劑
        2.2.4 實驗方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 重組酵母SC/rho1誘導(dǎo)表達
        2.3.2 CWI信號通路相關(guān)基因檢測
        2.3.3 重組酵母細胞壁多糖組分分析
    2.4 討論
第三章 重組釀酒酵母SC/rho1的生防效力分析和抑菌機理初探
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 試驗儀器
        3.2.2 培養(yǎng)基與果實
        3.2.3 酵母菌株和病原真菌
        3.2.4 酵母細胞壁的制取
        3.2.5 試驗方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 活體重組酵母和滅活重組酵母對梨果實青霉病的直接抑制作用
        3.3.2 活體重組酵母和滅活重組酵母對梨果實青霉病的誘導(dǎo)抗性作用
        3.3.3 酵母果實傷口生長動態(tài)
        3.3.4 酵母代謝產(chǎn)物對梨果實青霉病的抑制作用
        3.3.5 酵母細胞壁濃度對梨果實青霉病抗性的影響
        3.3.6 野生型與重組型酵母細胞壁誘導(dǎo)梨果實抗性的作用比較
        3.3.7 重組酵母對梨果實抗性相關(guān)基因表達的影響
    3.4 討論
第四章 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化
    4.1 前言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 試驗儀器
        4.2.2 培養(yǎng)基
        4.2.3 菌株和質(zhì)粒
        4.2.4 試驗試劑
        4.2.5 試驗方法
    4.3 實驗結(jié)果與分析
        4.3.1 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1目的基因的優(yōu)化和合成
        4.3.2 Ace-AMP1、AC-AMP2和MiAMP1目的基因檢測
        4.3.3 目的基因與pPICZα A表達載體的構(gòu)建
        4.3.4 重組表達載體向畢赤酵母GS115的轉(zhuǎn)化
    4.4 小結(jié)
第五章 重組畢赤酵母GS115/Ace-AMP1、GS115/Ac-AMP2和GS115/MiAMP1抗菌肽的表達及抑菌效力評價
    5.1 前言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 試驗儀器
        5.2.2 培養(yǎng)基與果實
        5.2.3 酵母菌株和病原菌
        5.2.4 試驗方法
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 重組酵母抗菌肽基因檢測
        5.3.2 重組酵母抗菌肽Western-blot檢測
        5.3.3 重組酵母蛋白含量檢測
        5.3.4 抗菌肽對擴展青霉體外抑制影響
        5.3.5 抗菌肽對梨果實青霉病的抑制作用
        5.3.6 抗菌肽重組酵母對梨果實青霉病的抑制作用
    5.4 討論
第六章 羅倫隱球酵母表達系統(tǒng)初探
    6.1 前言
    6.2 材料和方法
        6.2.1 試驗儀器
        6.2.2 培養(yǎng)基
        6.2.3 菌株與質(zhì)粒
        6.2.4 試驗試劑
        6.2.5 試驗方法
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 GAP啟動子和羅倫隱球酵母25S rDNA獲取
        6.3.2 GAP啟動子和羅倫隱球酵母25S rDNA與載體構(gòu)建
        6.3.3 GAP啟動子和羅倫隱球酵母25S rDNA表達載體的驗證
    6.4 討論
第七章 結(jié)論與展望
    7.1 主要研究結(jié)論
    7.2 主要創(chuàng)新點
    7.3 后續(xù)研究展望
參考文獻
作者簡介



本文編號：3860219