發(fā)布時(shí)間：2023-04-12 03:27

　　海洋微生物對(duì)環(huán)境脅迫響應(yīng)與適應(yīng)是當(dāng)今環(huán)境微生物學(xué)研究領(lǐng)域前沿科學(xué)問(wèn)題。據(jù)報(bào)道,在海洋玫瑰桿菌屬和SAR11屬模式菌株中存在磷限制條件下細(xì)胞膜脂重構(gòu)現(xiàn)象,海洋細(xì)菌通過(guò)合成一系列無(wú)磷含氮膜脂和糖脂代替細(xì)胞正常磷脂,以應(yīng)對(duì)海洋生態(tài)低磷環(huán)境。因此,海洋細(xì)菌在磷限制條件下細(xì)胞膜脂代謝和調(diào)控機(jī)制成為該領(lǐng)域研究的前沿和熱點(diǎn)。海洋異養(yǎng)細(xì)菌Candidatus Pelagibacter sp.HTCC7211在磷缺乏下膜脂重構(gòu)過(guò)程中磷脂酶PlcP已得到較為深入研究,但對(duì)膜脂重構(gòu)(Lipid Remodelling)中另一個(gè)關(guān)鍵酶糖基轉(zhuǎn)移酶研究較少。利用生物化學(xué)和生物信息學(xué)方法,對(duì)糖基轉(zhuǎn)移酶的生化性質(zhì)和催化反應(yīng)機(jī)制等進(jìn)行廣泛研究,闡明糖基轉(zhuǎn)移酶在海洋細(xì)菌糖脂合成過(guò)程中的具體功能,對(duì)理解海洋細(xì)菌膜脂重構(gòu)生物功能具有重要意義。本文從GenBank得到GT_cp的核苷酸序列,通過(guò)體外PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,用NdeI和SalI酶切目的基因與載體連接,獲得重組質(zhì)粒pET15b/GT_cp,并將其在Escherichia coli BL21中成功表達(dá)。借助去垢劑溶解目的蛋白,...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 甘油糖脂
        1.1.1 甘油糖脂的分類
        1.1.2 甘油糖脂的生物功能
        1.1.3 酶的合成
        1.1.4 甘油糖脂的提取方法
        1.1.5 甘油糖脂的純化與分離方法
    1.2 磷限制下海洋細(xì)菌中的膜質(zhì)重構(gòu)
    1.3 本課題的立題意義及研究?jī)?nèi)容
        1.3.1 立題依據(jù)與意義
        1.3.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 糖基轉(zhuǎn)移酶GTCP基因克隆、表達(dá)純化與活性分析
    2.1 試驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 質(zhì)粒和感受態(tài)細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 主要儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 基因GT_cp的克隆和重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 酶的表達(dá)與純化
        2.2.3 糖基轉(zhuǎn)移酶GT_cp活性檢測(cè)
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 基因GT_cp的克隆
        2.3.2 糖基轉(zhuǎn)移酶GT_cp的純化
        2.3.3 酶的活性分析
    2.4 小結(jié)
第三章 糖基轉(zhuǎn)移酶GTCP的酶學(xué)性質(zhì)研究
    3.1 試驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 溫度對(duì)酶活的影響
        3.2.2 pH對(duì)酶活的影響
        3.2.3 Na Cl濃度對(duì)酶活的影響
        3.2.4 金屬離子對(duì)酶活的影響
        3.2.5 表面活性劑、還原劑和變性劑對(duì)酶活的影響
        3.2.6 動(dòng)力學(xué)研究
        3.2.7 GT_cp在最佳條件下催化DAG生成MGlu-DAG
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 溫度對(duì)GT_cp的影響
        3.3.2 pH對(duì) GT_cp酶活的影響
        3.3.3 Na Cl濃度對(duì)GT_cp酶活的影響
        3.3.4 金屬離子對(duì)GT_cp轉(zhuǎn)糖基活性的影響
        3.3.5 表面活性劑、還原劑和變性劑對(duì)GT_cp酶活的影響
        3.3.6 GT_cp的底物特異性
        3.3.7 最佳條件下GT_cp催化DAG生成MGlu-DAG
    3.4 小結(jié)
第四章 酶的生物信息學(xué)分析與點(diǎn)突變體構(gòu)建
    4.1 材料與方法
    4.2 結(jié)果與討論
        4.2.1 GT_cp的氨基酸序列和結(jié)構(gòu)分析
        4.2.2 GT_cp的催化機(jī)制與底物結(jié)合機(jī)制研究
    4.3 小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文目錄
致謝



本文編號(hào)：3790332