發(fā)布時間：2023-02-06 12:08

　　馬氏珠母貝(Pinctada martensii),因盛產優(yōu)質珍珠而聞名于世,是中國南方沿海地區(qū)培育珍珠的主要貝類。珍珠主要通過外套膜包裹珠核進行人工“插核手術”后培育,整個過程會伴隨著貝體的炎癥及免疫反應。因此,珍珠貝的外套膜在珍珠形成中起著重要的作用。目前,珍珠貝在采珠后的貝肉多被廢棄,其外套膜主要營養(yǎng)成分是蛋白質,所以,充分開發(fā)利用外套膜的功能價值是非常必要的。本文采用酶法制備馬氏珠母貝外套膜酶解產物,通過體外、體內實驗進行皮膚創(chuàng)傷愈合功能作用的研究,為進行深入研究提供理論基礎和方向。本研究主要內容和結果如下:(1)通過酶法制備馬氏珠母貝外套膜酶解物(EHMPM),建立小鼠皮膚全皮層創(chuàng)傷模型,以涂抹和灌胃給藥兩種方式評價其促愈合活性。EHMPM蛋白質含量為55.66 g/100g,其中,肽含量占蛋白含量的21.56%;必需氨基酸占總氨基酸的63.02%;支鏈氨基酸分別占總氨基酸的32.92%;疏水性氨基酸占總氨基酸的59.75%。與陰性對照組相比,涂抹給藥EHMPM能顯著縮短止血時間,無毒性;兩種方式給藥EHMPM均顯著縮短上皮化時間,提高傷口愈合率。第7天,與兩個對照組相比,涂...

【文章頁數】：108 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 緒論
    1.1 皮膚創(chuàng)傷愈合概況
    1.2 天然促愈活性物質研究進展
        1.2.1 陸生植物來源的活性物質
        1.2.2 陸生動物來源的活性物質
        1.2.3 海洋來源的活性物質
    1.3 海洋貝類創(chuàng)傷愈合研究進展及存在問題
        1.3.1 海洋貝類在炎癥和創(chuàng)傷愈合的的傳統(tǒng)使用
        1.3.2 海洋貝類的抗炎作用及促愈活性研究進展
    1.4 珍珠貝活性物質研究進展
        1.4.1 解酒護肝
        1.4.2 改善記憶
        1.4.3 抗氧化作用
        1.4.4 保濕作用
        1.4.5 其他活性發(fā)現
    1.5 本課題研究的目的意義和主要內容
        1.5.1 研究目的及意義
        1.5.2 研究內容
2 馬氏珠母貝外套膜酶解物促進小鼠皮膚創(chuàng)傷修復研究
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 材料與試劑
        2.1.2 儀器與設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 EHMPM制備及主要成分分析
        2.2.2 EHMPM游離氨基酸組成分析
        2.2.3 EHMPM急性皮膚毒性試驗
        2.2.4 EHMPM體外抗菌實驗
        2.2.5 EHMPM體表促凝血實驗
        2.2.6 動物分組及創(chuàng)傷模型建立
        2.2.7 愈合率及瘢痕殘留率
        2.2.8 創(chuàng)面組織中生化指標測定
        2.2.9 數據統(tǒng)計分析
    2.3 結果與分析
        2.3.1 EHMPM的主要成分分析
        2.3.2 涂抹給藥酶解物對創(chuàng)傷修復的影響
        2.3.3 灌胃給藥酶解物對創(chuàng)傷修復的影響
    2.4 討論
        2.4.1 EHMPM對抗菌的影響
        2.4.2 EHMPM對止血的影響
        2.4.3 EHMPM對創(chuàng)面愈合的影響
        2.4.4 EHMPM對炎癥細胞因子的影響
        2.4.5 EHMPM對增殖期生長因子的影響
        2.4.6 EHMPM對組織重塑的影響
    2.5 本章小結
3 馬氏珠母貝外套膜酶解超濾組分促進小鼠皮膚創(chuàng)傷修復研究
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 材料與試劑
        3.1.2 儀器與設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 UCEHMPM制備
        3.2.2 UCEHMPM主要營養(yǎng)成分分析
        3.2.3 UCEHMPM游離氨基酸組成分析
        3.2.4 UCEHMPM急性皮膚毒性試驗
        3.2.5 UCEHMPM體外抗菌實驗
        3.2.6 UCEHMPM體外促凝血實驗
        3.2.7 動物分組及創(chuàng)傷模型建立
        3.2.8 愈合率及瘢痕殘留率
        3.2.9 ELISA分析
        3.2.10 組織學評估的組織準備
        3.2.11 H&E和 Masson染色
        3.2.12 免疫組織化學
        3.2.13 天狼星紅苦味酸染色
        3.2.14 數據分析
    3.3 結果與分析
        3.3.1 UCEHMPM的主要成分分析
        3.3.2 體外抗菌實驗
        3.3.3 體外促凝血實驗
        3.3.4 涂抹給藥超濾組分對創(chuàng)傷修復的影響
        3.3.5 灌胃給藥超濾組分對創(chuàng)傷修復的影響
    3.4 討論
        3.4.1 UCEHMPM營養(yǎng)成分對創(chuàng)傷愈合的影響
        3.4.2 UCEHMPM對止血及抗菌的影響
        3.4.3 UCEHMPM對創(chuàng)面愈合的影響
        3.4.4 UCEHMPM對炎癥細胞因子的影響
        3.4.5 UCEHMPM對細胞增殖期上皮化的影響
        3.4.6 UCEHMPM對組織重塑的影響
    3.5 本章小結
4 馬氏珠母貝外套膜生物活性肽分離純化及機制初步探討
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 材料與試劑
        4.1.2 儀器與設備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 馬氏珠母貝外套膜<3 KDa超濾組分的制備
        4.2.2 <3 KDa超濾組分的主要肽序列分析
        4.2.3 Sephadex G-25 凝膠過濾層析
        4.2.4 HaCaT和 HSF增殖實驗
        4.2.5 數據分析
    4.3 結果與分析
        4.3.1 <3 KDa超濾組分分子量分布的質譜分析
        4.3.2 <3 KDa超濾組分的特征肽序列分析
        4.3.3 <3 KDa超濾組分對細胞增殖的影響
        4.3.4 Sephadex G-25 分離純化及對細胞增殖的影響
    4.4 討論
    4.5 本章小結
5 馬氏珠母貝外套膜活性肽軟膏制備及促愈修復探討
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 材料與試劑
        5.1.2 儀器與設備
    5.2 實驗方法
        5.2.1 馬氏珠母貝外套膜< 3KDa超濾組分的制備
        5.2.2 馬氏珠母貝外套膜活性肽的軟膏制備
        5.2.3 軟膏急性皮膚毒性試驗
        5.2.4 動物分組及創(chuàng)傷模型建立
        5.2.5 愈合率及瘢痕殘留率
        5.2.6 ELISA分析
        5.2.7 組織學評估的組織準備
        5.2.8 H&E染色
        5.2.9 免疫組織學
        5.2.10 天狼星紅苦味酸染色
        5.2.11 數據分析
    5.3 結果與分析
        5.3.1 軟膏外觀及形狀
        5.3.2 急性皮膚毒性實驗結果
        5.3.3 創(chuàng)面形態(tài)變化觀察
        5.3.4 愈合率及愈合時間
        5.3.5 炎癥因子測定
        5.3.6 生長因子測定
        5.3.7 軟膏給藥小鼠創(chuàng)傷的組織學評價
        5.3.8 軟膏給藥小鼠創(chuàng)傷免疫組學分析
        5.3.9 軟膏對TGF-β/Smad信號通路的影響
        5.3.10 軟膏對膠原蛋白和瘢痕形成的影響
    5.4 討論
    5.5 本章小結
6 結論與展望
    6.1 研究結論
    6.2 研究創(chuàng)新點
    6.3 展望
參考文獻
致謝
作者簡介
導師簡介



本文編號：3735972