通過(guò)基因工程技術(shù)生產(chǎn)人Cu,Zn-SOD具有產(chǎn)量高,活性穩(wěn)定,純度高的優(yōu)點(diǎn),且避免了Cu,Zn-SOD異源蛋白排斥的免疫性過(guò)敏反應(yīng),解決了從血液中提取Cu,Zn-SOD的排異問(wèn)題。對(duì)Cu,Zn-SOD的工業(yè)生產(chǎn)和在醫(yī)療、生化品及食品中的應(yīng)用具有重大的意義。本研究旨在利用基因工程的方法,構(gòu)建人Cu,Zn-SOD的原核表達(dá)工程菌和真核表達(dá)工程菌,分別優(yōu)化其發(fā)酵條件以提高表達(dá)量和酶活性,并對(duì)兩種表達(dá)工程菌進(jìn)行比對(duì)和分析,以利于后續(xù)的研究和生產(chǎn)。本研究根據(jù)大腸桿菌密碼子偏好性對(duì)人Cu,Zn-SOD的核苷酸序列改造并人工合成,將其與質(zhì)粒pET-22b（+）結(jié)合構(gòu)建表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21（DE3）中,以IPTG誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)分泌表達(dá),并進(jìn)一步對(duì)其發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化以提高表達(dá)量和蛋白活性。根據(jù)釀酒酵母密碼子偏好性對(duì)人Cu,Zn-SOD的核苷酸序列改造并人工合成,將其與質(zhì)粒pAUR123結(jié)合構(gòu)建表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化入釀酒酵母中,并進(jìn)一步對(duì)其發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化以提高表達(dá)量和蛋白活性。通過(guò)運(yùn)用工程菌的優(yōu)勢(shì)密碼子對(duì)外源目的基因進(jìn)行改造,提高工程菌異源表達(dá)量,充分發(fā)揮各自的優(yōu)勢(shì),挖掘大腸桿菌和釀酒酵母作為異源表達(dá)工... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線(xiàn)

Cu,Zn-SOD活性中心結(jié)構(gòu)

圖 1.2 人 Cu, Zn-SOD 三級(jí)結(jié)構(gòu)Cu, Zn-SOD 的活性中心像一個(gè)橢圓形口袋的形狀，銅離子位于口水分子和 4 個(gè)組氨酸形成配位，靠近溶劑面，參與酶的催化反應(yīng)，天冬氨酸和三個(gè)組氨酸配位，包埋于疏水基團(tuán)中，維持和穩(wěn)定酶的

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]氧化自由基清除劑超氧化物歧化酶與疾病[J]. 張笑天,鄭曉瑛.  中國(guó)公共衛(wèi)生. 2014(10)

博士論文
[1]重組PTD-Cu/Zn SOD的構(gòu)建及其對(duì)心肌損傷的保護(hù)作用研究[D]. 劉菊英.武漢大學(xué) 2013

碩士論文
[1]人Cu，Zn-SOD工程酶在畢赤酵母中的表達(dá)研究[D]. 杜姍姍.吉林大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3618545