腫瘤治療性疫苗可誘導(dǎo)機(jī)體特異性免疫殺傷腫瘤細(xì)胞,抑制惡性腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā),具有良好的臨床應(yīng)用前景。然而,由于可高效誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫反應(yīng)的疫苗佐劑不足,同時(shí)由于腫瘤免疫耐受的存在和疫苗在體內(nèi)遞送效率低下等原因,造成腫瘤治療性疫苗治療效果不理想,嚴(yán)重限制了疫苗的臨床應(yīng)用。針對(duì)這些問(wèn)題,本文使用了一種新型鋁佐劑(鎂鋁水滑石,LDH),并聯(lián)合應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)分子,設(shè)計(jì)得到了三類能夠抵抗腫瘤抑制性免疫環(huán)境和腫瘤抗原多發(fā)性突變的多功能腫瘤治療疫苗,并提出了新的疫苗皮下遞送或注射途徑優(yōu)化策略,顯著提高了疫苗在體內(nèi)誘發(fā)免疫應(yīng)答的效率,提高了疫苗的免疫治療效果。具體開(kāi)展的研究工作如下:1.研究制備的能夠共遞送IDO抑制劑(siIDO)和抗原Trp2的LDH納米疫苗(TLIs)有效緩解樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)的免疫抑制狀態(tài),促進(jìn)抗原特異性免疫應(yīng)答。在腫瘤患者體內(nèi),腫瘤細(xì)胞釋放的促炎性因子導(dǎo)致DC胞內(nèi)吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)過(guò)度表達(dá),進(jìn)而影響色氨酸代謝,并造成DC由免疫激活態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)槊庖咭种茟B(tài)。TLIs具備快速的內(nèi)涵體逃逸能力,能夠迅速將siIDO與Trp2釋放到細(xì)胞質(zhì)。一方面,siIDO通過(guò)干擾IDO m...

【文章來(lái)源】： 中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所)北京市

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摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
第1章 緒論
    1.1 腫瘤主動(dòng)免疫治療所面臨的主要挑戰(zhàn)
        1.1.1 臨床佐劑現(xiàn)狀
        1.1.2 腫瘤免疫耐受的發(fā)生及潛在的對(duì)抗策略
        1.1.3 新型遞送系統(tǒng)的發(fā)展及其在體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程
    1.2 水滑石納米佐劑的發(fā)展與應(yīng)用
        1.2.1 水滑石的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用
        1.2.2 水滑石的組成、制備及其佐劑活性
        1.2.3 影響水滑石抗原負(fù)載能力的因素
        1.2.4 水滑石與細(xì)胞間的相互作用
        1.2.5 水滑石疫苗的體內(nèi)遞送過(guò)程及膠體穩(wěn)定性調(diào)控策略
        1.2.6 水滑石與商業(yè)化佐劑的對(duì)比及其抗腫瘤免疫應(yīng)用
        1.2.7 水滑石生物安全性
    1.3 立題依據(jù)和目標(biāo)
        1.3.1 論文立題依據(jù)
        1.3.2 論文工作目標(biāo)及策略
第2章 共遞送IDO抑制劑和抗原的LDH疫苗研究
    2.1 引言
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 主要疫苗配方及縮寫對(duì)照
        2.1.4 LDH納米疫苗的制備
        2.1.5 TLIs雙功能納米疫苗的表征
        2.1.6 細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.7 細(xì)胞毒性測(cè)定
        2.1.8 細(xì)胞吞噬與胞內(nèi)分布
        2.1.9 TLIs下調(diào)IDO表達(dá)的能力測(cè)定
        2.1.10 TLIs疫苗的體內(nèi)分布
        2.1.11 免疫與腫瘤抑制
        2.1.12 抗原特異性CTL反應(yīng)測(cè)定
        2.1.13 抗原特異性毒性記憶T細(xì)胞水平及相關(guān)炎癥因子測(cè)定
        2.1.14 LDH生物安全性評(píng)價(jià)
        2.1.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.2 結(jié)果與討論
        2.2.1 TLIs的制備及性質(zhì)表征
        2.2.2 TLIs的細(xì)胞吞噬能力及胞內(nèi)分布
        2.2.3 TLIs下調(diào)IDO表達(dá)的能力
        2.2.4 TLIs的體內(nèi)分布
        2.2.5 TLIs抑制小鼠黑色素瘤能力評(píng)估
        2.2.6 LDH安全性評(píng)估
    2.3 本章小結(jié)
第3章 體內(nèi)穩(wěn)定分散的LDH多價(jià)腫瘤疫苗的研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 主要疫苗配方及縮寫對(duì)照
        3.2.4 LDH的合成及s-/a-BLC的制備
        3.2.5 “BSA-抗原”復(fù)合物及s-BmALC三價(jià)納米疫苗的制備
        3.2.6 BLC體外分散性測(cè)試
        3.2.7 細(xì)胞吞噬及分布
        3.2.8 體內(nèi)分布情況
        3.2.9 免疫與體內(nèi)抑瘤功能測(cè)定
        3.2.10 體內(nèi)CTL反應(yīng)測(cè)定
        3.2.11 抗原特異性毒性記憶T細(xì)胞水平及相關(guān)炎癥因子測(cè)定
        3.2.12 LDH生物安全性評(píng)價(jià)
        3.2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 LDH及相關(guān)疫苗的制備
        3.3.2 s-BLC和a-BLC在生理環(huán)境下的分散性能測(cè)定
        3.3.3 疫苗分散性對(duì)于細(xì)胞吞噬和胞內(nèi)分布的影響
        3.3.4 疫苗分散性對(duì)其淋巴節(jié)浸潤(rùn)能力的影響
        3.3.5 疫苗體內(nèi)遞送過(guò)程優(yōu)化對(duì)于黑色素瘤抑制的體內(nèi)評(píng)價(jià)
        3.3.6 個(gè)性化疫苗誘發(fā)廣譜抗腫瘤T細(xì)胞免疫應(yīng)答能力的評(píng)估
    3.4 本章小結(jié)
第4章 聯(lián)合光熱療法和化學(xué)療法的多功能LDH納米佐劑研究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 主要疫苗配方及縮寫對(duì)照
        4.2.4 LDH及IB-LDH的制備與表征
        4.2.5 Dox/DNA、IDB-LDH、ICB-LDH和IDCB-LDH的制備
        4.2.6 光熱轉(zhuǎn)化效率評(píng)價(jià)
        4.2.7 NIR介導(dǎo)的Dox體外釋放能力
        4.2.8 NIR誘導(dǎo)的胞內(nèi)Dox釋放
        4.2.9 細(xì)胞毒性評(píng)估
        4.2.10 IDCB-LDH的腫瘤靶向性及體內(nèi)分布
        4.2.11 體內(nèi)治療
        4.2.12 抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答水平測(cè)定
        4.2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 IDCB-LDH的理化性質(zhì)表征
        4.3.2 IDCB-LDH的分散性
        4.3.3 NIR刺激的IDCB-LDH光熱轉(zhuǎn)化能力及Dox釋放
        4.3.4 光熱療法和化學(xué)治療的協(xié)同作用評(píng)價(jià)
        4.3.5 體內(nèi)分布及腫瘤靶向性測(cè)定
        4.3.6 PTT和CTX協(xié)同清除原位腫瘤
        4.3.7 原位抗腫瘤免疫應(yīng)答的誘發(fā)與維持
    4.4 本章小結(jié)
第5章 靶向脾臟和淋巴結(jié)的新型LDH疫苗注射策略的研究
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.2.3 主要疫苗配方及方法縮寫對(duì)照
        5.2.4 不同尺寸LDH的合成及穩(wěn)定化處理方法
        5.2.5 CO-LDH及CT-LDH納米疫苗的制備及表征
        5.2.6 疫苗脾臟靶向能力及體內(nèi)分布測(cè)定
        5.2.7 DC激活與抗原提呈
        5.2.8 小鼠E.G7-OVA腫瘤模型的構(gòu)建與免疫
        5.2.9 小鼠B16F10腫瘤模型的構(gòu)建與免疫
        5.2.10 抗體測(cè)定
        5.2.11 脾臟記憶性T細(xì)胞及瘤內(nèi)T細(xì)胞測(cè)定
        5.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 不同粒徑LDH納米疫苗的合成與表征
        5.3.2 不同粒徑CO-LDH與細(xì)胞間的相互作用
        5.3.3 不同粒徑CO-LDH的脾臟靶向及抗腫瘤免疫應(yīng)答誘導(dǎo)能力
        5.3.4 IV與SC注射介導(dǎo)的疫苗體內(nèi)分布與遷移
        5.3.5 注射方式對(duì)治療性疫苗誘導(dǎo)免疫應(yīng)答及淋巴瘤抑制的影響
        5.3.6 不同免疫策略對(duì)預(yù)防性疫苗抑制淋巴瘤能力的影響
        5.3.7 不同免疫注射途徑組合對(duì)體內(nèi)黑色素瘤生長(zhǎng)抑制的影響
        5.3.8 脾臟和LNs為靶點(diǎn)的同時(shí)免疫對(duì)于晚期黑色素瘤的抑制作用
    5.4 本章小結(jié)
第6章 結(jié)論和展望
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點(diǎn)總結(jié)
    6.3 后期工作展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果



本文編號(hào)：3549096