發(fā)布時(shí)間：2021-11-22 11:24

　　目的:本文利用基于低共熔溶劑的雙水相溶劑系統(tǒng)和中壓制備液相聯(lián)用技術(shù)高效分離海地瓜多肽中的活性肽,應(yīng)用化學(xué)和生物學(xué)活性評(píng)價(jià)方法對(duì)分離得到的每個(gè)組分進(jìn)行降壓、抗氧化和降糖活性研究,為開(kāi)發(fā)海地瓜活性肽功能食品、特醫(yī)食品和新藥的研究與開(kāi)發(fā)提供參考。方法:1.海地瓜多肽制備工藝研究（1）以海地瓜為原料,以血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制率為評(píng)價(jià)指標(biāo),利用正交實(shí)驗(yàn),優(yōu)化海地瓜多肽的酶解條件。（2）應(yīng)用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法,測(cè)定海地瓜的主要營(yíng)養(yǎng)成分和海地瓜及多肽中氨基酸含量,并根據(jù)氨基酸模式和全雞蛋蛋白模式分別計(jì)算海地瓜及多肽的氨基酸評(píng)分、化學(xué)評(píng)分和必需氨基酸指數(shù),評(píng)價(jià)其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。2.海地瓜活性肽的分離純化（1）以ACE抑制率為評(píng)價(jià)指標(biāo),應(yīng)用基于低共熔溶劑的雙水相溶劑系統(tǒng),通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn),優(yōu)化海地瓜活性肽分離富集條件。（2）通過(guò)色譜條件的優(yōu)化,利用中壓制備液相色譜對(duì)海地瓜活性肽的富集部位進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化。3.海地瓜活性肽的活性研究以ACE抑制能力為指標(biāo)對(duì)海地瓜活性肽不同活性組分的降壓活性進(jìn)行評(píng)價(jià),以自由基清除能力及總抗氧化能力為指標(biāo)對(duì)海地瓜活性肽... 

【文章來(lái)源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1雙縮脲標(biāo)準(zhǔn)曲線

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文海地瓜活性肽的篩選與評(píng)價(jià)15的微量元素，約占體重的0.15%，鈉主要分布于機(jī)體的骨骼、細(xì)胞外液及內(nèi)液，可以保持水代謝平衡、酸堿平衡、血壓正常以及增強(qiáng)神經(jīng)肌肉興奮性。海地瓜的鈉含量高達(dá)14.8g/100g，是東海刺參的3倍。海地瓜營(yíng)養(yǎng)成分含量與東海刺參相近，且具有價(jià)格低廉的優(yōu)勢(shì)，因此在開(kāi)發(fā)低價(jià)高值的海洋功能性食品方面具有很大的潛力。2.3.2海地瓜多肽蛋白酶的篩選Seung等[71]研究發(fā)現(xiàn)多肽的活性與其氨基酸組成密切相關(guān)，因此篩選蛋白酶是制備活性多肽的關(guān)鍵步驟。本文選用9種蛋白酶，確定料液比1:8（w/v），加酶量5%（w/w），在其最適條件下酶解4h，各酶解產(chǎn)物的ACE抑制抑制能力見(jiàn)圖2-2。圖2-2不同海地瓜酶解液的ACE抑制能力（±SD，n=3）Fig.2-2ACEinhibitorycapabilityofhydrolysatesofAcaudinamolpadioidesproducedbydifferentproteases(±SD,n=3)由圖2-2可知，9種蛋白酶酶解產(chǎn)物的ACE抑制活性之間存在差異。各蛋白酶酶解產(chǎn)物的ACE抑制率分別為H1（22.08%）、H2（未檢出）、H3（39.14%）、H4（51.18%）、H5（37.33%）、H6（22.94%）、H7（25.32%）、H8（17.59%）、H9（2.65%），以H4的酶解產(chǎn)物ACE抑制率最高。H4為風(fēng)味蛋白酶，它包含真菌蛋白酶和肽酶，具有內(nèi)切蛋白酶和外切肽酶兩種活性，將多肽內(nèi)部或末端酶解為短肽和氨基酸，其酶解度高，并且它的最適pH為中性，酶解過(guò)程成本小，易操作。綜合考慮，選擇H4作為制備海地瓜多肽的蛋白酶。2.3.3海地瓜多肽酶解工藝的優(yōu)化確定風(fēng)味蛋白酶為酶解用酶后，本文以多肽得率（PY）為指標(biāo)，進(jìn)一步優(yōu)化酶解工藝，結(jié)果見(jiàn)表2-5。

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文海地瓜活性肽的篩選與評(píng)價(jià)22機(jī)濾膜過(guò)濾，上樣于HPLC。色譜條件為：色譜柱依利特SinoChromODS-BP色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，進(jìn)樣量為20μL，柱溫為室溫。通過(guò)優(yōu)化流動(dòng)相比例、洗脫方式、流速等色譜條件，確定HPLC色譜分離條件。將HPLC色譜條件轉(zhuǎn)化為中壓制備液相色譜條件，通過(guò)中壓制備液相對(duì)海地瓜活性肽進(jìn)一步分離純化。3.3結(jié)果與討論3.3.1海地瓜活性肽的分離富集1.基于DES的ATPS的相圖圖3-1基于低共熔溶劑的雙水相溶劑系統(tǒng)相圖Fig.3-1PhasediagramsofDES-basedATPS參照文獻(xiàn)[53]，利用七種DES分別與三種鹽溶液C6H5K3O7、(NH4)2SO4、K2HPO4制備ATPS，結(jié)果發(fā)現(xiàn)僅K2HPO4能夠與各DES形成ATPS。以一定濃度的K2HPO4作為鹽相，通過(guò)濁點(diǎn)滴定法獲得雙節(jié)點(diǎn)曲線數(shù)據(jù)，繪制相圖，如圖3-1所示。由圖3-1可知，七種DES的相形成能力從高到低依次為：氯化膽堿-尿素（1:2）>氯化膽堿-麥芽糖（1:1）>氯化膽堿-葡萄糖（1:1）>氯化膽堿-1，4-丁二醇（1:2）>氯化膽堿-甘油（1:2）>氯化膽堿-乙二醇（1：2）>氯化膽堿-山梨糖醇（1:1）。基于DES的ATPS由DES和無(wú)機(jī)鹽溶液組成，二者是影響相平衡的主要因素。Deng等[81]和Li等[77]將四種無(wú)機(jī)鹽溶液（(NH4)2SO4、Na2SO4、Na2HPO4、K2HPO4）分別與同一種DES混合制備ATPS，結(jié)果發(fā)現(xiàn)僅K2HPO4可以與DES形成ATPS，與本文結(jié)果一致。Xu等[82]研究發(fā)現(xiàn)不同的鹽溶液與DES成相能力從高到低依次為：Na2CO3>K2HPO4>NaH2PO4>C6H5Na3O7·3H2O，說(shuō)明無(wú)機(jī)鹽的陰離子與水分子之間的相互作用力越強(qiáng)越容易與DES形成ATPS。Zhang等[83]

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3511590