右旋糖酐是葡萄糖經(jīng)過脫水縮合形成的一種生物多糖,廣泛應用于食品、醫(yī)藥、化工、污水處理等多個領域,在這些領域中發(fā)揮很重要的作用。右旋糖酐的衍生物右旋糖酐鐵是一種臨床應用價值較高的補鐵劑。本課題在用酶法制備并獲得低分子量右旋糖酐T5的基礎上,通過氧化反應獲得氧化型右旋糖酐,隨后選用合適的氧化型右旋糖酐制備右旋糖酐鐵并優(yōu)化合成工藝,同時,對氧化型右旋糖酐和右旋糖酐鐵的理化性質(zhì)進行研究和分析。研究內(nèi)容及分析結(jié)果如下:1、本課題對重組畢赤酵母產(chǎn)右旋糖酐酶的工藝進行進一步優(yōu)化,隨后對酶的熱穩(wěn)定性和酶法制備低分子量右旋糖酐進行研究。其中產(chǎn)右旋糖酐酶的最適工藝條件是每24h添加0.25%山梨醇和0.62%甲醇,pH值為5.08。在探究孵育溫度對右旋糖酐酶活力的半衰期的影響實驗中發(fā)現(xiàn),30℃溫度條件是比較適合右旋糖酐酶的長時間催化反應。通過研究底物濃度、酶濃度和反應時間對右旋糖酐酶催化降解高分子量右旋糖酐的影響實驗,發(fā)現(xiàn)底物濃度過大不利于此酶催化反應,酶濃度的增加會影響底物降解速率,反應時間的延長雖然會使底物降解得更多,但是降解速率會隨之減小。右旋糖酐酶對右旋糖酐的親和力隨其分子量的減小而降低。5%底物... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．４本研究的實驗方案??Ｆｉｇ?１．４?Ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｓｃｈｅｍｅ?ｏｆ?ｔｈｉｓ?ｓｔｕｄｙ??１２??

合肥工業(yè)大學學術碩士研究生學位論文??２．４．２右旋糖酐酶的熱穩(wěn)定性??１００?ｐ?＊??，—??＊?——?－?■?２５°Ｃ??９?＼?？?３０ｔ??＾９０?－?…?＼?▲?３宂??Ｉ０－??＿ｒ??＇??Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ．?Ｉ??ｌｈ?２ｈ?４ｈ?５ｈ?６ｈ?ｌＯｈ?１６ｉｉ?１８ｈ?２０ｈ?２４ｈ?２ｄａｙ?３ｄａｙ?４ｄａｙ?６ｄａｙ?８ｄａｙ?ｌＯｄａｙ?１９ｄａｙ?２３ｄａｙ?２６ｄａｙ??Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ??圖２．２不同溫度對右旋糖酐酶活力的影響??Ｆｉｇ?２．２?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｏｎ?ｄｅｘｔｒａｎａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ??從圖２．２中可以看到，隨著溫度的上升右旋糖酐酶的穩(wěn)定性在減弱，其中在２５°Ｃ??下保溫，酶的穩(wěn)定性最好，在保溫２６ｄａｙ時達到了酶的半衰期；在３０°Ｃ下保溫，??在保溫８ｄａｙ時達到了酶的半衰期；在３５°Ｃ下保溫，在保溫２４ｈ時達到了酶的半衰??期。所以如果要保障酶的穩(wěn)定性，應該選用２５°Ｃ和３０°Ｃ，但是在前期的研究中也??有指出（以最適溫度下的酶活力效應為１００％）在一定時間內(nèi)，在２５°Ｃ下右旋糖酐??酶催化右旋糖酐Ｔ７０水解反應中只能發(fā)揮大約８２％的酶活力效應，而３０°Ｃ該酶能??夠發(fā)揮大約９８％的酶活力效應。所以用來研宄右旋糖酐酶的長時間催化情況，可??選用３０°Ｃ溫度條件進行酶催化反應。??２４??

?，??２００?■?：?＾：?ＩＳ：??１００?■?ｉ?ｍ＿＿＿?＾?＿＿＿—▲丨?２０」?ｓ??〇」?！＿，＂７７７Ｚｒ７Ｔ７．ｆ?；?ｉ?ＴＴＴＴ＾Ｐ－．－．；?ｌｏ－?、＾■?－ｔ＾?￣?￣ｔ??１?ｉ?■?ｉ?■?ｉ?■?ｉ?■?０?＇?ｉ?１?ｊ?１?ｉ?１?ｉ?１??０．５ｈ?ｌｈ?１．５ｈ?２ｈ?〇．５ｈ?ｌｈ?ｌ．５ｈ?２ｈ??Ｒｅｃａｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ?Ｒｅｃａｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ??圖２．３不同底物濃度下酶催化右旋糖酐的分子《：變化??Ｆｉｇ?２．３?Ｅｎｚｙｍｅ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ｄｅｘｔｒａｎ?ａｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｕｂｓｔｒａｔｅ??ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ??圖２．３中顯示，在５Ｕ／ｍｌ右旋糖酐酶的條件下，１％、２．５％、５％，７．５％和１０％??的高分子右旋糖酐溶液，進行〇．５ｈ酶水解反應后，分子量分別降到大約２０ｋＤａ、??５１ｋＤａ、２５１ｋＤａ、４５１７ｋＤａ和４７９５ｋＤａ，說明底物濃度越低，右旋糖酐分子量降解越??快。由于高分子量右旋糖酐的濃度越大其粘度也越大，底物溶液粘度過高會影響反??應中酶在底物溶液中的流動性，造成高分子量右旋糖酐與右旋糖酐酶的結(jié)合困難，??酶的活動區(qū)域有限，會影響酶的總體水解反應速率。隨著反應的繼續(xù)進行，可以看??到在０．５ｈ至ｌｈ的反應時間內(nèi)，１％和２．５％的降解速度要５％、７．５％和１０％的降解??速度慢很多，這是因為右旋糖酐酶經(jīng)過一段時間的降解，對于低濃度底物體系而言，??高分子量右旋糖酐己經(jīng)降解成中、低分

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]棘孢青霉右旋糖酐酶基因克隆、表達及酶學研究[D]. 吳敏.合肥工業(yè)大學 2018
[2]低分子量右旋糖酐的氧化機制及右旋糖酐鐵的制備研究[D]. 陳爽.合肥工業(yè)大學 2018



本文編號：3301262