胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin,TSLP）的表達(dá)分布廣泛,主要包括肺、皮膚和腸道屏障表面的上皮細(xì)胞等。呼吸道被過(guò)敏原或病原微生物刺激后,TSLP的表達(dá)會(huì)上調(diào)。TSLP可以促進(jìn)DC細(xì)胞（樹(shù)突狀細(xì)胞）成熟。成熟的DC細(xì)胞會(huì)誘導(dǎo)過(guò)敏性哮喘�；蚪M學(xué)研究發(fā)現(xiàn),TSLP是過(guò)敏性炎癥的相關(guān)位點(diǎn)。在小鼠過(guò)敏原誘導(dǎo)哮喘模型和靈長(zhǎng)類過(guò)敏原誘導(dǎo)的哮喘模型中,已經(jīng)證實(shí)胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素在誘導(dǎo)過(guò)敏性哮喘中扮演了關(guān)鍵角色。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了 TSLP及WM35-Fab（TSLP抗體）兩種瞬轉(zhuǎn)和穩(wěn)轉(zhuǎn)質(zhì)粒,在瞬轉(zhuǎn)確認(rèn)了 TSLP及WM35-Fab在293E中可順利表達(dá)后,我們構(gòu)建TSLP及WM35-Fab穩(wěn)轉(zhuǎn)的CHO細(xì)胞株。為了便于純化,我們?cè)赥SLP及WM35-Fab蛋白C端連接組氨酸標(biāo)簽。TSLP及WM35-Fab his標(biāo)簽蛋白通過(guò)Ni柱親和層析和分子排阻色譜層析拿到了高純度蛋白。TSLP及WM35-Fab蛋白由于是穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株表達(dá),均一性較高。我們嘗試不同孵育比例后,發(fā)現(xiàn)WM35-Fab:TSLP摩爾比在1:3時(shí),W35-Fab/TSLP蛋白復(fù)合物孵育效果最好。... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１ＴＳＬＰ與哮喘的關(guān)系［２ＱＩ??Ｆｉｇ．?１－ｌＴｈｅ?ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＴＳＬＰ?ａｎｄ?ａｓｔｈｍａ?剛??

?第一章緒論???他雜質(zhì)的分離。??１．２．２．１．１親和層析原理??ｅ的產(chǎn)物?�。荆�?□?〇??－－ｙｒｙ＾ｒｙｒｙ＊?＂＇?￣＇?????＼??介質(zhì)??圖１－２親和層析的原理ｄ??Ｆｉｇ．１－２?Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?Ａｆｆｉｎｉｔｙ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?卩７］??蛋白親和層析技術(shù)利用柱子基質(zhì)所偶聯(lián)的特殊蛋白或者分子與目的蛋白可以特??異性親和吸附這一生物特性，直接從成分復(fù)雜的上清培養(yǎng)液中捕獲目的蛋白一步純化??就可以得到高純度的目的蛋白。由于基質(zhì)填料所偶聯(lián)的特殊蛋白或者分子與目的蛋白??具有高親和力，目的蛋白在成分復(fù)雜上清中即使?jié)舛群艿鸵部梢圆东@。??本實(shí)驗(yàn)主要使用的是鎳離子純化柱。鎳離子純化柱主要原理：在目的蛋白序列的??Ｎ端或Ｃ端加上六個(gè)特定的肽段序列：ＨＨＨＨＨＨ，?ＨＨＨＨＨＨ又稱為ｈｉｓ標(biāo)簽［３８］。鎳??柱基質(zhì)上偶聯(lián)的鎳離子可以特異性的捕獲ｈｉｓ標(biāo)簽，讓目的蛋白與培養(yǎng)液上清其他復(fù)??雜雜質(zhì)分離。Ｎｉ２＋與ｈｉｓ標(biāo)簽特異性結(jié)合原理：ｈｉｓ又稱組氨酸，組氨酸Ｒ基上是五元??雜環(huán)化合物，Ｒ基可以Ｎｉ２＋結(jié)合。咪唑的空間結(jié)構(gòu)和組氨酸上的Ｒ基類似，也可以??Ｎｉ２＋結(jié)合［％。因?yàn)樵阪囍H和層析中選用咪唑作為流動(dòng)相。蛋白純化上樣前通常在含??有Ｈｉｓ標(biāo)簽的目的重組蛋白的培養(yǎng)上清中加入一定低濃度的咪唑，通常是２０ｍＭ，低??濃度的咪唑可以與培養(yǎng)上清中的無(wú)關(guān)雜質(zhì)和Ｎｉ２＋的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，避免雜質(zhì)被鎳離子吸??附，從而獲得高純度的目的重組蛋白。??１．２．２．１．２親和層析標(biāo)簽??在所有的親和標(biāo)簽中，ｈｉｓ標(biāo)簽最常用。Ｈｉｓ標(biāo)簽具有很多有點(diǎn)，例如配體簡(jiǎn)單，??７??

理??ｒ：??＿?＇、?１?Ｓｕｐｅｒｓａｔｕｒａｔ？ｏｎ?｜??－Ｙ?＼?．??１＊?＿?＼?＼Ｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ?＼??？?＊?々、?Ｉ?ＳｉｉｐＰｆｓｒｆｕｈｉｌｉｆｖ??Ｍｅｔａｓｔａｂｌｅ?ｃｕｒｖｅ??一???１?、＇、？Ｉ?ｚｏｎｅ??［．２—＾?Ｔ?＾．?ｓｏｉｕｂｉｌｒｔｙｃｕｒｖｅ??ｉ?ｊ?｜?｛?｜?｜?＾??Ａｄｊｕｓｔａｂｌｅ?ｐａｒａｍｅｔｅｒ??ＯｊｒｒｅｒｔＯｐ＾ｒ?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?８？３ｋ＾??圖１－３晶體結(jié)晶原理圖…】??Ｆｉｇ．ｌ－３Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｃｒ＼；ｓｔａｌ?ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ１４３１??圖１－３展示了一個(gè)經(jīng)典的晶體結(jié)晶原理圖。蛋白結(jié)晶相圖一共可以根據(jù)不同區(qū)域??的飽和度不同而進(jìn)行劃分為四個(gè)區(qū)域。在沉淀區(qū)，由于區(qū)域內(nèi)蛋白處于極度過(guò)飽和狀??態(tài)，蛋白會(huì)自發(fā)形成沉淀，很低概率形成晶體；在成核區(qū)，由于蛋白濃度中度飽和，??晶體會(huì)自發(fā)形成晶核；在亞穩(wěn)態(tài)區(qū)，也是晶體形成區(qū)域。低飽和區(qū)蛋白會(huì)在己經(jīng)形成??的晶核進(jìn)行一定順序的堆疊，最終生長(zhǎng)出晶體；不飽和區(qū)由于蛋白在此區(qū)域內(nèi)和正常??９??

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在慢性鼻—鼻竇炎中的表達(dá)及其臨床意義[D]. 朱慧濤.山東大學(xué) 2015
[2]抗胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（TSLP）全人源單鏈抗體的篩選及特性分析[D]. 朱建光.四川醫(yī)科大學(xué) 2015
[3]人胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素在特應(yīng)性皮炎和濕疹發(fā)病機(jī)制中的作用[D]. 賈鑫璇.瀘州醫(yī)學(xué)院 2013
[4]親和層析技術(shù)的研究及應(yīng)用[D]. 王桂珍.暨南大學(xué) 2011
[5]哮喘小鼠胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素及其受體的表達(dá)以及布地奈德、卡介苗干預(yù)的影響[D]. 王淑麗.蘇州大學(xué) 2009
[6]胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（TSLP）在鼻息肉的表達(dá)及意義[D]. 趙菲.山西醫(yī)科大學(xué) 2007



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