谷氨酰胺酶合成γ-谷氨酰肽及其抗氧化性的研究
發(fā)布時(shí)間:2021-03-03 09:36
γ-谷氨酰肽是由谷氨酰胺或谷氨酸的γ-羧基和氨基酸或肽分子的α-氨基發(fā)生脫水縮合反應(yīng)所得的一類小分子肽,廣泛存在于自然界的動(dòng)植物和微生物中。γ-谷氨酰肽可從天然物質(zhì)中提取得到,也可通過化學(xué)合成法制備得到,但酶法合成法是應(yīng)用更為廣泛的制備γ-谷氨酰肽的方法,γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GGT)是最為常用、研究最為深入的一種酶制劑。已有研究證明,部分微生物來源的谷氨酰胺酶也能催化γ-谷氨;D(zhuǎn)移反應(yīng),但關(guān)于將其應(yīng)用于合成γ-谷氨酰肽的研究則是近年來才有所進(jìn)展,對(duì)谷氨酰胺酶合成γ-谷氨酰肽的研究可擴(kuò)大谷氨酰胺酶的應(yīng)用范圍,同時(shí)也可為合成γ-谷氨酰肽提供新的酶制劑來源,在實(shí)際的生產(chǎn)應(yīng)用中具有重要意義。在此基礎(chǔ)上,本論文利用解淀粉芽孢桿菌來源的谷氨酰胺酶,分別以半胱氨酸和色氨酸為γ-谷氨;荏w,谷氨酰胺為γ-谷氨;w,合成γ-谷氨酰肽并對(duì)合成條件進(jìn)行了優(yōu)化,探究了γ-谷氨酰肽的抗氧化活性。本論文首先探究了兩種商用的解淀粉芽孢桿菌來源谷氨酰胺酶的酶學(xué)特性。結(jié)果表明,酶A和酶B均能催化水解和轉(zhuǎn)肽反應(yīng),在pH 10.0、溫度37℃的條件下,其水解酶活...
【文章來源】:華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:108 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
第一章 緒論
1.1 谷氨酰胺酶的概述
1.2 γ-谷氨酰肽的概述
1.3 天然的γ-谷氨酰肽
1.4 γ-谷氨酰肽的分析檢測(cè)
1.5 γ-谷氨酰肽的生理活性
1.5.1 γ-谷氨酰肽與病理學(xué)指標(biāo)
1.5.2 γ-谷氨酰肽與神經(jīng)系統(tǒng)
1.5.3 γ-谷氨酰肽與炎癥反應(yīng)
1.5.4 γ-谷氨酰肽與肝腎功能
1.5.5 γ-谷氨酰肽與鈣離子敏感受體的變構(gòu)調(diào)節(jié)作用
1.5.6 其他生理活性
1.6 γ-谷氨酰肽的制備方法
1.6.1 自然提取法
1.6.2 化學(xué)合成法
1.6.3 微生物發(fā)酵法
1.6.4 酶合成法
1.7 氧化應(yīng)激與抗氧化肽
1.7.1 活性氧簇的概述
1.7.2 氧化應(yīng)激與疾病
1.7.3 抗氧化肽的研究現(xiàn)狀
1.8 本論文的立題依據(jù)和研究?jī)?nèi)容
1.8.1 本論文的立題依據(jù)
1.8.2 本論文的研究?jī)?nèi)容
第二章 兩種谷氨酰胺酶的酶學(xué)特性研究
2.1 引言
2.2 材料與方法
2.2.1 試劑與儀器
2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.3 結(jié)果與分析
2.3.1 谷氨酰胺酶的水解及轉(zhuǎn)肽酶活力
2.3.2 pH對(duì)谷氨酰胺酶催化活性的影響
2.3.3 pH對(duì)谷氨酰胺酶穩(wěn)定性的影響
2.3.4 溫度對(duì)谷氨酰胺酶催化活性的影響
2.3.5 溫度對(duì)谷氨酰胺酶穩(wěn)定性的影響
2.3.6 鹽含量對(duì)谷氨酰胺酶催化活性的影響
2.4 本章小結(jié)
第三章 LX-1000EP環(huán)氧基樹脂固定化谷氨酰胺酶的研究
3.1 引言
3.2 材料與方法
3.2.1 試劑與儀器
3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
3.3 結(jié)果與分析
3.3.1 溶劑pH對(duì)固定化效果的影響
3.3.2 吸附時(shí)間對(duì)固定化效果的影響
3.3.3 相對(duì)加酶量對(duì)固定化效果的影響
3.3.4 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果與分析
3.4 本章小結(jié)
第四章 谷氨酰胺酶合成γ-谷氨酰肽的研究
4.1 引言
4.2 材料與方法
4.2.1 試劑與儀器
4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
4.3 結(jié)果與分析
4.3.1 γ-谷氨;荏w的篩選結(jié)果
4.3.2 UPLC-MS/MS分離鑒定反應(yīng)液體系中的γ-谷氨酰肽
4.3.3 HPLC檢測(cè)反應(yīng)液體系中的γ-谷氨酰肽
4.3.4 pH對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.5 溫度對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.6 酶添加量對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.7 反應(yīng)時(shí)間對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.8 底物濃度對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.9 底物比例對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.10 降低產(chǎn)物濃度對(duì)γ-谷氨酰肽產(chǎn)率的影響
4.4 本章小結(jié)
第五章 γ-谷氨酰肽及其酶促反應(yīng)液的抗氧化性研究
5.1 引言
5.2 材料與方法
5.2.1 試劑與儀器
5.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
5.3 結(jié)果與分析
5.3.1 γ-谷氨酰肽清除DPPH自由基的能力
5.3.2 γ-谷氨酰肽的還原力
5.3.3 γ-谷氨酰肽螯合Fe2+的能力
5.3.4 γ-谷氨酰肽清除ABTS自由基的能力
5.3.5 γ-谷氨酰肽清除超氧陰離子自由基(O2?-)的能力
5.3.6 γ-谷氨酰化對(duì)氨基酸抗氧化活性的影響
5.4 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
一、結(jié)論
二、創(chuàng)新點(diǎn)
三、展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]兩種谷氨酰胺酶的酶學(xué)特性研究[J]. 盧慧茵,王煒,崔春. 中國(guó)調(diào)味品. 2018(10)
[2]食源性抗氧化肽分離純化方法研究進(jìn)展[J]. 蓋莉莉,高丹丹,李明生,馬洪鑫,程浩,田曉靜,陳士恩. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào). 2018(16)
[3]離子選擇電極法測(cè)定谷氨酰胺酶活力研究[J]. 崔春,徐明,楊娟,王煒. 中國(guó)調(diào)味品. 2017(02)
[4]酶催化合成L-茶氨酸的研究進(jìn)展[J]. 李元,劉珊,?. 食品科學(xué). 2017(23)
[5]γ-谷氨酰肽呈味特性、鑒定及制備方法研究進(jìn)展[J]. 姚玉靜,崔春,黃俊偉. 中國(guó)調(diào)味品. 2016(03)
[6]動(dòng)物體內(nèi)活性氧、氧化應(yīng)激與細(xì)胞凋亡以及抗氧化劑研究進(jìn)展[J]. 朱若岑,蔣維維,譚柱良,易金娥. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志. 2015(03)
[7]線粒體氧化應(yīng)激與天然抗氧化劑研究進(jìn)展[J]. 李興太,紀(jì)瑩. 食品科學(xué). 2015(07)
[8]谷胱甘肽生物合成及代謝相關(guān)酶的研究進(jìn)展[J]. 王瑋瑋,唐亮,周文龍,楊燕,高波,趙云峰,王偉. 中國(guó)生物工程雜志. 2014(07)
[9]抗氧化肽的構(gòu)效關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 張暉,唐文婷,王立,錢海峰,齊希光. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2013(07)
[10]發(fā)酵法生產(chǎn)谷胱甘肽的研究進(jìn)展[J]. 湯亞杰,徐小玲,李冬生. 食品與發(fā)酵工業(yè). 2007(01)
碩士論文
[1]酵母細(xì)胞通透性的調(diào)控及其合成谷胱甘肽研究[D]. 孫怡然.南昌大學(xué) 2018
[2]利用重組鈍齒棒桿菌高效表達(dá)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶及酶催化合成L-茶氨酸研究[D]. 和斐.江南大學(xué) 2016
[3]醬油鮮味肽的分離純化鑒定及呈味特性研究[D]. 莊明珠.華南理工大學(xué) 2015
本文編號(hào):3061043
【文章來源】:華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:108 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
第一章 緒論
1.1 谷氨酰胺酶的概述
1.2 γ-谷氨酰肽的概述
1.3 天然的γ-谷氨酰肽
1.4 γ-谷氨酰肽的分析檢測(cè)
1.5 γ-谷氨酰肽的生理活性
1.5.1 γ-谷氨酰肽與病理學(xué)指標(biāo)
1.5.2 γ-谷氨酰肽與神經(jīng)系統(tǒng)
1.5.3 γ-谷氨酰肽與炎癥反應(yīng)
1.5.4 γ-谷氨酰肽與肝腎功能
1.5.5 γ-谷氨酰肽與鈣離子敏感受體的變構(gòu)調(diào)節(jié)作用
1.5.6 其他生理活性
1.6 γ-谷氨酰肽的制備方法
1.6.1 自然提取法
1.6.2 化學(xué)合成法
1.6.3 微生物發(fā)酵法
1.6.4 酶合成法
1.7 氧化應(yīng)激與抗氧化肽
1.7.1 活性氧簇的概述
1.7.2 氧化應(yīng)激與疾病
1.7.3 抗氧化肽的研究現(xiàn)狀
1.8 本論文的立題依據(jù)和研究?jī)?nèi)容
1.8.1 本論文的立題依據(jù)
1.8.2 本論文的研究?jī)?nèi)容
第二章 兩種谷氨酰胺酶的酶學(xué)特性研究
2.1 引言
2.2 材料與方法
2.2.1 試劑與儀器
2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.3 結(jié)果與分析
2.3.1 谷氨酰胺酶的水解及轉(zhuǎn)肽酶活力
2.3.2 pH對(duì)谷氨酰胺酶催化活性的影響
2.3.3 pH對(duì)谷氨酰胺酶穩(wěn)定性的影響
2.3.4 溫度對(duì)谷氨酰胺酶催化活性的影響
2.3.5 溫度對(duì)谷氨酰胺酶穩(wěn)定性的影響
2.3.6 鹽含量對(duì)谷氨酰胺酶催化活性的影響
2.4 本章小結(jié)
第三章 LX-1000EP環(huán)氧基樹脂固定化谷氨酰胺酶的研究
3.1 引言
3.2 材料與方法
3.2.1 試劑與儀器
3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
3.3 結(jié)果與分析
3.3.1 溶劑pH對(duì)固定化效果的影響
3.3.2 吸附時(shí)間對(duì)固定化效果的影響
3.3.3 相對(duì)加酶量對(duì)固定化效果的影響
3.3.4 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果與分析
3.4 本章小結(jié)
第四章 谷氨酰胺酶合成γ-谷氨酰肽的研究
4.1 引言
4.2 材料與方法
4.2.1 試劑與儀器
4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
4.3 結(jié)果與分析
4.3.1 γ-谷氨;荏w的篩選結(jié)果
4.3.2 UPLC-MS/MS分離鑒定反應(yīng)液體系中的γ-谷氨酰肽
4.3.3 HPLC檢測(cè)反應(yīng)液體系中的γ-谷氨酰肽
4.3.4 pH對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.5 溫度對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.6 酶添加量對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.7 反應(yīng)時(shí)間對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.8 底物濃度對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.9 底物比例對(duì)產(chǎn)物種類及產(chǎn)率的影響
4.3.10 降低產(chǎn)物濃度對(duì)γ-谷氨酰肽產(chǎn)率的影響
4.4 本章小結(jié)
第五章 γ-谷氨酰肽及其酶促反應(yīng)液的抗氧化性研究
5.1 引言
5.2 材料與方法
5.2.1 試劑與儀器
5.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
5.3 結(jié)果與分析
5.3.1 γ-谷氨酰肽清除DPPH自由基的能力
5.3.2 γ-谷氨酰肽的還原力
5.3.3 γ-谷氨酰肽螯合Fe2+的能力
5.3.4 γ-谷氨酰肽清除ABTS自由基的能力
5.3.5 γ-谷氨酰肽清除超氧陰離子自由基(O2?-)的能力
5.3.6 γ-谷氨酰化對(duì)氨基酸抗氧化活性的影響
5.4 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
一、結(jié)論
二、創(chuàng)新點(diǎn)
三、展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]兩種谷氨酰胺酶的酶學(xué)特性研究[J]. 盧慧茵,王煒,崔春. 中國(guó)調(diào)味品. 2018(10)
[2]食源性抗氧化肽分離純化方法研究進(jìn)展[J]. 蓋莉莉,高丹丹,李明生,馬洪鑫,程浩,田曉靜,陳士恩. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào). 2018(16)
[3]離子選擇電極法測(cè)定谷氨酰胺酶活力研究[J]. 崔春,徐明,楊娟,王煒. 中國(guó)調(diào)味品. 2017(02)
[4]酶催化合成L-茶氨酸的研究進(jìn)展[J]. 李元,劉珊,?. 食品科學(xué). 2017(23)
[5]γ-谷氨酰肽呈味特性、鑒定及制備方法研究進(jìn)展[J]. 姚玉靜,崔春,黃俊偉. 中國(guó)調(diào)味品. 2016(03)
[6]動(dòng)物體內(nèi)活性氧、氧化應(yīng)激與細(xì)胞凋亡以及抗氧化劑研究進(jìn)展[J]. 朱若岑,蔣維維,譚柱良,易金娥. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志. 2015(03)
[7]線粒體氧化應(yīng)激與天然抗氧化劑研究進(jìn)展[J]. 李興太,紀(jì)瑩. 食品科學(xué). 2015(07)
[8]谷胱甘肽生物合成及代謝相關(guān)酶的研究進(jìn)展[J]. 王瑋瑋,唐亮,周文龍,楊燕,高波,趙云峰,王偉. 中國(guó)生物工程雜志. 2014(07)
[9]抗氧化肽的構(gòu)效關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 張暉,唐文婷,王立,錢海峰,齊希光. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2013(07)
[10]發(fā)酵法生產(chǎn)谷胱甘肽的研究進(jìn)展[J]. 湯亞杰,徐小玲,李冬生. 食品與發(fā)酵工業(yè). 2007(01)
碩士論文
[1]酵母細(xì)胞通透性的調(diào)控及其合成谷胱甘肽研究[D]. 孫怡然.南昌大學(xué) 2018
[2]利用重組鈍齒棒桿菌高效表達(dá)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶及酶催化合成L-茶氨酸研究[D]. 和斐.江南大學(xué) 2016
[3]醬油鮮味肽的分離純化鑒定及呈味特性研究[D]. 莊明珠.華南理工大學(xué) 2015
本文編號(hào):3061043
本文鏈接:http://www.sikaile.net/projectlw/hxgylw/3061043.html
最近更新
教材專著