維生素B2（核黃素）是生物體內(nèi)的輔酶黃素腺嘌呤二核甘酸（FAD）和黃素單核甘酸（FMN）的前體,在氧化還原和電子傳遞中起著重要的作用。它能促進蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物的代謝,是生命活動中不可缺少的維生素[1]。本文主要是以B.subtilis為研究對象,對產(chǎn)維生素B2的培養(yǎng)基進行優(yōu)化,并對該重組菌的代謝機理進行初步研究。首先,通過PB和RSM設(shè)計對B.subtilis產(chǎn)核黃素發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化,最終確定培養(yǎng)基的配方:葡萄糖100 g/L,玉米漿（干粉）30 g/L,酵母粉5g/L,尿素3 g/L,無水MgSO41 g/L,（NH4）2SO4 5g/L,KH2PO4 1.5 g/L,K2HPO4 2.42 g/L。B.subtilis產(chǎn)核黃素搖瓶發(fā)酵產(chǎn)量從529 IU/mL提高到639 IU/mL,產(chǎn)量提高了約20.8%。對7 L發(fā)酵罐上分批發(fā)酵控制條件進行優(yōu)化并確立接種量2.5%-5%,種子培養(yǎng)時間10 h,控制pH 6.8-7.0,溶氧20%以上。隨后分別考察了間歇補料方式和連續(xù)補料方式對菌體生長和產(chǎn)量的影響,發(fā)現(xiàn)連續(xù)補料分批培養(yǎng)方式（葡萄糖濃度在10 g/L左右）的產(chǎn)量最高達到48... 

【文章來源】：華東理工大學上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２核黃素操縱子結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇ．?１．２?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ?ｏｐｅｒｏｎ??

－〇ｈ?／??ｈ＇＆？?／??ｕｎｋｎｏｗｎ?／??Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ?Ｚ??Ｔｘ?——Ｒｌ，Ｃ?＞??Ａ「Ｐ?￥?°?ＲｉｂＨ＾?ｆ?Ｎ?°??ＣＨｊ?Ｈ?＜ｐＨｊ??Ｈ—Ｃ—ＯＨ?Ｈ—Ｃ—ＯＨ??Ｈ￣４－〇Ｈ?Ｈ－？－〇Ｈ?ＤＲＬ??Ｈ—Ｇ—ＯＨ?Ｈ—Ｃ—ＯＨ??ＣＨｊＯＨ?ＣＨｊＯＨ??ＲｉｂＢｇ＾?｜?Ｒｉｂ５ｐ叼??＂Ｃｃ＾ｘ??Ｈ＾Ｃ?丨?Ｎ?Ｏ??Ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ?ｈ－｜－〇ｈ??Ｈ—－ｐ—ＯＨ??ＣｈｆｅＯＨ??圖１．５維生素１３２在生物體內(nèi)的合成過程??Ｆｉｇ．?１．５?Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｖｉｔａｍｉｎ?Ｂ２?ｉｎ?ｖｉｖｏ??１．５．４代謝物組學概述??代謝物組學（Ｍｅｔａｂｏｎｏｍｉｃｓ）對由于體內(nèi)代謝、環(huán)境改變、遺傳變異等產(chǎn)生的各種物質(zhì)，??運用現(xiàn)代檢測手段進行高通量檢測和數(shù)據(jù)分析，了解生物整體或組織細胞系統(tǒng)的動態(tài)代謝變??化。它的研究思想與基因組學和蛋白質(zhì)組學相近，研宄對象也大都是相對分子質(zhì)量小于１０００??的小分子物質(zhì)，通過對生物體內(nèi)某一時刻所有代謝物進行定量分析，找出代謝物與生理病理變??化之間的關(guān)系。代謝物組學研宄需要與先進的檢測手段以及系統(tǒng)分析方法形結(jié)合才能得以實現(xiàn)??［４９］??〇??

種方法。這些方法之間各有優(yōu)劣。如核磁共振??（ＮＭＲ）雖然分辨率較差，但可以進行實時動態(tài)監(jiān)測，主要適用于植物檢測；氣質(zhì)（ＧＣ－ＭＳ）??聯(lián)用分辨率高，靈敏度好，有用于定性分析的標準圖譜和自動識別的質(zhì)譜峰識別鑒定系統(tǒng)，缺??點是對難揮發(fā)的組分需要衍生，無法檢測熱不穩(wěn)定性組分；液質(zhì)（ＬＣ－ＭＳ）聯(lián)用適用于熱不穩(wěn)??定性組分檢測，無需衍生，具有強大的分離能力，但樣品需要濃縮，也沒有用于樣品識別的標??準文庫；其余兩種方法雖然分辨率高，由于方法復雜，起步較晚，應用還不是很廣［４＜Ｗ４］。??圖１．６是整個代謝工程研宄中涉及過程和檢測方法。??細．?斗換＞意體??Ｃｅｌｌ＾ｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｓａｍｐｌｅ?Ｂｉｏｆｌｕｉｄｅ??臉內(nèi)?Ｓｉｌｌ?物?Ｆ：ｘｆｒａｃｄ?丨ｕｉａｒ?ｅｘｔｒａｃｔ??Ｃｅｉｌ?ｅｘｔｒａｃｔ?（Ｅｘｔｒｏｉｔ＾）??Ｚ?＼?ｊ－ｉｉ??ｉｊｓｏｌａｔｅ－ｄ?ｔｒａｃｔｉｏｎ?．．?ＮＭＲ??Ｚ?ｔ?＼?Ｗ?鎌?ｓ??ｆｆ！生化?＿Ｓｉｇ?高效＿＆１?＜?Ｈ?４?＼?ｔＳ�。В停�??Ｄｅｒｉｖａｔｉｓａｔｔｏｎ?ＩＸ？?ＨＰＬＣ?ｆＩ生化＼液相ｆｅ鐠．？￡＿管Ｈｉ泳?縛頌卟幻外??＼／?Ｄｅｒｉｖａｔｉｓａｔｉ〇ｎ＼?ＩＸ?ＣＥ??Ｗ?＼?＼?ｆ－＇ｉ?ｉＪ．?＃??ｃ￡４?砸?ＭＳ?ｕｖ?ｉ?“?Ｖ??＼?／?氣《?色?ｉｌｌ?＿腦??＼?／?－ｇｉｇ?ＮＭＲ?ＥＳＩ－ＭＳ?士??Ｈ＜＿物及代謝請分析乂?Ｓ＼?；?Ｚ??Ｍｅｔａｔｘ＞Ｉｉｔｅ?ｔａｒｇｅｔ?ｍｍｌｐｉｓ?代齋樹?ｆ！分析?Ｍｅｉａｂｏｌ?丨?ｔ＇?ｆｌ．ｒｐｒ＿ｒｉｇ??ａｎｄ?ｍｅｔａｂｏｉｈｅ?

【參考文獻】：
期刊論文
[1]響應面分析優(yōu)化霉酚酸發(fā)酵培養(yǎng)基[J]. 婁忻,賈嘯靜,劉勝利,陳麗華.  河北化工. 2009(09)
[2]統(tǒng)計優(yōu)化技術(shù)在微生物發(fā)酵中的應用[J]. 張楠,夏尚遠,劉訓理.  山東農(nóng)業(yè)大學學報(自然科學版). 2009(03)
[3]紫外分光光度法測定巖鹽中的硝酸鹽[J]. 劉氘,陳虹,張啟云.  光譜實驗室. 2009(02)
[4]新鮮蔬菜和水果中硝酸鹽紫外分光光度法的測定[J]. 楊錨,邵華,金芬,王靜,葉志華,劉肅.  華中農(nóng)業(yè)大學學報. 2009(01)
[5]核黃素在脂質(zhì)代謝中的作用[J]. 高欣,楊永賓,蔡美琴.  中國臨床營養(yǎng)雜志. 2008(05)
[6]代謝組學分析技術(shù)及數(shù)據(jù)處理技術(shù)[J]. 盧紅梅,梁逸曾.  分析測試學報. 2008(03)
[7]釀酒酵母體內(nèi)氮的代謝作用[J]. 楊瑞娟,吳雪昌.  農(nóng)機化研究. 2008(01)
[8]利用響應面法優(yōu)化Bacillus natto TK-1產(chǎn)脂肽發(fā)酵培養(yǎng)基[J]. 曹小紅,蔡萍,李凡,王春玲,魯梅芳.  中國生物工程雜志. 2007(04)
[9]釀酒酵母糖酵解途徑中酶量變化對乙醇濃度影響的模擬分析[J]. 孔德翀,楊雪蓮,嚴明,柳常青,許琳.  生物工程學報. 2007(02)
[10]代謝組學及其在微生物領(lǐng)域的研究進展[J]. 周宏偉,譚鳳儀,鐘音,欒天罡.  分析化學. 2007(02)

博士論文
[1]產(chǎn)核黃素枯草芽孢桿菌中心碳代謝的代謝工程[D]. 朱英波.天津大學 2007
[2]基于基因組重排的產(chǎn)核黃素枯草芽孢桿菌的代謝工程[D]. 陳濤.天津大學 2004

碩士論文
[1]擬無枝酸菌轉(zhuǎn)化洛伐他汀為無錫他汀的發(fā)酵優(yōu)化及無錫他汀的初步提取[D]. 王方.江南大學 2008
[2]抗GB1-VFT的卵黃抗體在蛋白質(zhì)組學應用中的初步研究[D]. 冷毅斌.華中科技大學 2007



本文編號：3053226