發(fā)布時(shí)間：2020-12-19 20:43

　　本文目的是構(gòu)建菊粉酶基因、果膠酶基因及木聚糖酶基因,充分利用菊芋的主要成分。首先,將菊粉酶基因整合到實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建好的半乳糖(GAL)誘導(dǎo)型和磷酸甘油酸激酶(PGK)組成型這兩種強(qiáng)啟動(dòng)子的表達(dá)載體中來(lái)促進(jìn)釀酒酵母對(duì)菊粉的利用,通過(guò)培養(yǎng)基優(yōu)化提高酵母的乙醇產(chǎn)率,篩選出優(yōu)勢(shì)啟動(dòng)子PGK。為解決菊芋中果膠、木聚糖不能被釀酒酵母直接利用等難題,將果膠酶基因和木聚糖酶基因整合到含有PGK啟動(dòng)子的表達(dá)載體中,促進(jìn)酵母對(duì)底物的利用。其次,分別將菊粉酶基因、木聚糖酶基因和果膠酶基因通過(guò)電轉(zhuǎn)化的方法導(dǎo)入到畢赤酵母中,發(fā)酵完成后測(cè)定乙醇濃度。在這三種不同基因的作用下,將菊芋中各類多糖水解轉(zhuǎn)化為發(fā)酵性單糖制備燃料乙醇,這些酵母在燃料乙醇的制備應(yīng)用上具有重要價(jià)值。本研究的主要結(jié)果:(1)釀酒酵母宿主,以菊粉為底物的培養(yǎng)基中,野生型釀酒酵母產(chǎn)乙醇濃度為2.7 g/L,含PGK啟動(dòng)子轉(zhuǎn)基因酵母產(chǎn)乙醇濃度為71.74 g/L;含GAL啟動(dòng)子轉(zhuǎn)基因酵母產(chǎn)乙醇濃度為60.35 g/L,以木聚糖為底物的培養(yǎng)基中,野生型釀酒酵母產(chǎn)乙醇濃度為0.909 g/L,含PGK啟動(dòng)子轉(zhuǎn)基因酵母產(chǎn)乙醇濃度為11.17g/L;以果膠為底... 

【文章來(lái)源】：武漢輕工大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

菊粉的分子結(jié)構(gòu)

INU基因擴(kuò)增及表達(dá)載體構(gòu)建Fig.2.5AmplificationofINUgeneandconstructionofexpressionvector

質(zhì)粒圖譜

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同提取方法對(duì)菊芋塊莖總糖及還原糖含量的影響[J]. 田萌,蔣曉婷,田潔,王麗慧,鐘啟文.  青海大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(05)
[2]海藻糖與熱激蛋白在釀酒酵母耐受乙醇脅迫中的作用[J]. 方華,李灝.  中國(guó)生物工程雜志. 2014(06)
[3]果膠酶活力的測(cè)定方法研究[J]. 張飛,岳田利,費(fèi)堅(jiān),袁亞宏,高振鵬.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2004(04)
[4]分光光度法測(cè)定果膠酶活性方法的研究[J]. 李忠福,徐建國(guó).  黑龍江醫(yī)藥. 2002(06)
[5]酒精發(fā)酵中應(yīng)用酸性蛋白酶的研究[J]. 趙華,趙樹(shù)欣,張維,鄒海晏.  食品與發(fā)酵工業(yè). 1997(02)

博士論文
[1]食品級(jí)釀酒酵母高效分泌/展示表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建[D]. 郭欽.浙江大學(xué) 2009

碩士論文
[1]釀酒酵母不同生長(zhǎng)周期細(xì)胞對(duì)乙醇脅迫的響應(yīng)[D]. 易晨峰.北京化工大學(xué) 2015
[2]以菊芋為原料同步糖化發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇研究[D]. 楊利博.河北科技大學(xué) 2010



本文編號(hào)：2926542