孜然(Cuminum cyminum L.),屬于一年或兩年生的傘形科孜然芹屬植物,原產(chǎn)于地中海地區(qū),在中國(guó)主要分布于新疆。孜然含有多種活性成分,因其獨(dú)特的食用和藥用價(jià)值,在食品、醫(yī)藥等方面都有較好的應(yīng)用價(jià)值。目前,在化妝品行業(yè)追尋綠色、天然、安全、穩(wěn)定的美白劑已經(jīng)成為一種潮流,因此天然的植物資源成為美白劑的較好來源之一。本文以孜然為原料,優(yōu)化了孜然提取物抑制酪氨酸酶活性的提取工藝,測(cè)定了孜然提取物中主要活性成分的含量,研究了孜然提取物對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用及對(duì)小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞內(nèi)黑色素合成的影響,并考察了孜然提取物不同極性部位抗氧化活性及對(duì)酪氨酸酶活性的抑制效果,以期為孜然作為天然的美白材料應(yīng)用于化妝品行業(yè)提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.從乙醇、丙酮和水三種溶劑中篩選得到乙醇是孜然抑制酪氨酸酶活性成分的最佳提取溶劑。在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上結(jié)合響應(yīng)面設(shè)計(jì),優(yōu)化得到孜然提取物抑制酪氨酸酶活性的最佳提取工藝參數(shù):乙醇體積分?jǐn)?shù)71%,液料比16:1(m L/g),提取時(shí)間2.2h,提取溫度83℃,此優(yōu)化條件下得到的孜然提取物對(duì)酪氨酸酶活性抑制率達(dá)(42.61±0.56)%,與預(yù)測(cè)值接近。2.采用Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定多酚含量,Na NO_2-Al(NO_3)_3-Na OH比色法測(cè)定黃酮含量,香草醛比色法測(cè)定皂苷含量,苯酚-硫酸比色法測(cè)定多糖含量,結(jié)果表明孜然提取物中多酚、黃酮、皂苷、多糖的含量分別為(1.35±0.03)%、(4.40±0.29)%、(0.76±0.04)%、(4.89±0.28)%。3.孜然提取物對(duì)酪氨酸酶活性抑制作用的研究結(jié)果表明,孜然提取物對(duì)酪氨酸酶單酚酶和二酚酶活性都具有明顯的抑制效果,均呈濃度依賴關(guān)系,IC_(50)分別為1.027mg/m L和0.977mg/m L;孜然提取物能延長(zhǎng)酪氨酸酶催化氧化L-酪氨酸的遲滯時(shí)間,遲滯時(shí)間與孜然提取物濃度呈正相關(guān);孜然提取物抑制酪氨酸酶二酚酶活性的動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明,其抑制類型屬于可逆混合型,抑制常數(shù)K_I為0.62mg/m L。4.孜然提取物對(duì)小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞內(nèi)黑色素合成影響的研究結(jié)果表明,孜然提取物作用于B16黑色素瘤細(xì)胞后,不影響B(tài)16黑色素瘤細(xì)胞的正常生長(zhǎng),對(duì)細(xì)胞活力的影響不顯著,對(duì)細(xì)胞基本沒有毒性;孜然提取物對(duì)B16黑色素瘤細(xì)胞內(nèi)黑色素生成和酪氨酸酶活性均有顯著的抑制作用,且均呈時(shí)間和濃度依賴關(guān)系。5.孜然提取物不同極性部位均有抑制酪氨酸酶活性與清除DPPH、羥自由基和超氧陰離子自由基的活性,且抑制酪氨酸酶活性與抗氧化活性從強(qiáng)到弱的順序都為:乙酸乙酯部位正丁醇部位石油醚部位水部位。另外,孜然提取物不同極性部位抑制酪氨酸酶活性與抗氧化活性之間具有較強(qiáng)的正相關(guān)性,其中乙酸乙酯部位抑制酪氨酸酶活性與抗氧化活性均最強(qiáng),表明孜然提取物中抑制酪氨酸酶活性與具有抗氧化活性的成分都主要集中在乙酸乙酯部位。上述試驗(yàn)證明孜然提取物能顯著抑制酪氨酸酶活性及黑色素細(xì)胞內(nèi)黑色素的合成,并具有較強(qiáng)的抗氧化活性,為孜然在美白化妝品中的應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：蘭州理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：TQ658
【部分圖文】：

中心投影點(diǎn)越靠近橢圓中心，表示兩因素交互作用越顯著，且該因素對(duì)響應(yīng)值的影響越大[65,66]。圖 2.8 液料比和提取時(shí)間對(duì)酪氨酸酶抑制率影響的響應(yīng)面曲線及等高線Fig. 2.8 Response surface curves and contour lines of the influence of liquid materialratio and extraction time on tyrosinase inhibition rate

Fig. 2.8 Response surface curves and contour lines of the influence of liquid materialratio and extraction time on tyrosinase inhibition rate圖 2.9 乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取溫度對(duì)酪氨酸酶抑制率影響的響應(yīng)面曲線及等高線Fig. 2.9 Response surface curves and contour lines of the influence of ethanol concentrationand extraction temperature on tyrosinase inhibition rate

圖 5.1 孜然提取物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響Fig. 5.1 The effect of cumin extract on cell growth注：A、B、C、D 分別為 B16 黑色素瘤細(xì)胞經(jīng)受試樣品作用 24h 后，對(duì)照組、0.5mg/mL樣品、1.0mg/mL 樣品、1.0mg/mL 熊果苷作用的細(xì)胞形態(tài)圖；E、F、G、H 分別為細(xì)胞經(jīng)受試樣品作用 72h 后，對(duì)照組、0.5mg/mL 樣品、1.0mg/mL 樣品、1.0mg/mL 熊果苷作用的細(xì)胞形態(tài)圖。5.3.2 孜然提取物對(duì) B16 黑色素瘤細(xì)胞增殖的影響如表 5.1 所示，孜然提取物及熊果苷對(duì)小鼠 B16 黑色素瘤細(xì)胞生長(zhǎng)均有一定的抑制作用。孜然提取物對(duì) B16 黑色素瘤細(xì)胞活力的抑制效果較弱，當(dāng)孜然提取物濃度在 0.01~1.00mg/mL 范圍內(nèi)，細(xì)胞培養(yǎng) 24~72h 后，其對(duì)細(xì)胞活力均沒有顯著影響。當(dāng)孜然提取物濃度為 0.01mg/mL 時(shí)，細(xì)胞存活率較高，隨著孜然提取物濃度增大和細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，其對(duì)細(xì)胞活力的影響均不顯著（P > 0.05），尤其是當(dāng)孜然提取物濃度為 1.00mg/mL，細(xì)胞培養(yǎng) 72h 時(shí)，細(xì)胞活力仍能達(dá)到 85.32%，E F G H

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本文編號(hào)：2826213