本論文首先對實驗室保藏的一株放線菌進行活化培養(yǎng),然后進行平板菌落和搖瓶培養(yǎng)菌株的鏡檢觀察,并對其進行分子生物學的鑒定,經(jīng)鑒定后命名為:細黃鏈霉菌Streptomyces microflavus AMYa-008。隨后采用平板對峙的實驗方法,進行植物病害菌的拮抗效果研究,結(jié)果表明,細黃鏈霉菌S.microflavus AMYa-008對常見的8種植物病害真菌具有廣譜的抑制作用。基于木薯渣、稻殼等工、農(nóng)業(yè)固體廢棄物的細黃鏈霉菌S.microflavus AMYa-008的固體發(fā)酵,通過單因素和正交試驗條件的優(yōu)化以及中試放大實驗,最終確定細黃鏈霉菌S.microflavus AMYa-008的最佳固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方及條件:木薯渣89.85%,稻殼10%,KH_2PO_4 0.05%,NaCl 0.05%,MgSO_4 0.05%。菌株發(fā)酵溫度30℃,物料厚度5cm,接種量7.5%,培養(yǎng)時間4天,孢子產(chǎn)量為4.8×10~9 cfu/g,與初始空白條件相比,產(chǎn)孢量增加了33.3%;中試放大后產(chǎn)孢量為4.5×10~9 cfu/g�？紤]到生產(chǎn)成本,當接種量為5%時,孢子產(chǎn)量為4.2×10~9 cfu/g;中試放大后產(chǎn)孢量為4.0×10~9 cfu/g。發(fā)酵后的細黃鏈霉菌AMYa-008物料,采用低溫真空干燥工藝處理,孢子存活率最高,達到75%,與空白條件相比提高了30%。隨后,使用固體發(fā)酵產(chǎn)生的細黃鏈霉菌劑,進行盆栽生防實驗。通過回染的方法,來驗證其對植物的生防促生效果,并進行菌劑的生防效價和菌群結(jié)構(gòu)變化分析。結(jié)果顯示,所使用的細黃鏈霉菌的生防微生態(tài)菌劑在植物生長方面均表現(xiàn)出不同程度的生物防治和促進生長的作用,其中B7、D7效果最為顯著。植株生長中期,黃瓜苗和小麥苗在株高方面分別比空白對照提高了33.68%、7.73%,且染病程度輕;植株生長末期,黃瓜苗植株地上、地下部分長度,根部直徑、葉片厚度,地上、地下部分干重分別提高了25.89%、62.15%、16.04%、22.29%、11.08%、55.56%;除了根部直徑,小麥苗其他指標相應地分別比空白對照提高了6.83%、46.77%、5.16%、6.67%、25.95%。以上結(jié)論證明,該生防微生態(tài)菌劑能夠有效地防治植物病害菌的生長和繁殖,并促進植物的生長和產(chǎn)量的提高。最后,本論文采用DGGE方法對施加不同含量的微生態(tài)菌劑和進行植物病害真菌回染的盆栽條件進行土壤菌群結(jié)構(gòu)分析。其中,無論是在黃瓜還是小麥盆栽實驗中,菌濃為3×10~7cfu/g的B7、D7實驗組均取得了良好的生物防治效果。在黃瓜盆栽實驗中,B7實驗組菌劑的施加使得細菌菌群結(jié)構(gòu)在多樣性和豐富度方面比空白對照B1、僅施加病害菌的B2實驗組分別提高了73.81%、167%,12.31%、139.88%;使得真菌菌群結(jié)構(gòu)在多樣性和豐富度方面分別比B1、B2降低了67.21%、66.6%,74.59%、180%。在小麥實驗中,D7實驗組菌劑的施加使得細菌菌群結(jié)構(gòu)在多樣性和豐富度方面比空白對照D1、僅施加病害菌的D2實驗組分別提高了9.62%、54.13%,62.86%、84.86%;使得真菌菌群結(jié)構(gòu)在多樣性和豐富度方面分別比D1、D2降低了26.92%、60%,58.46%、180%。綜上所述,生防微生態(tài)菌劑的添加使用影響了土壤菌群的結(jié)構(gòu),尤其對土壤中的真菌表現(xiàn)出較為明顯的抑制作用。其中,活菌數(shù)為3×10~7cfu/g的生防效果最佳,在一定的菌劑濃度范圍內(nèi),有效活菌數(shù)量高的菌劑生防促生效果比較好。同時,進一步證明了本論文中基于木薯渣、稻殼等工、農(nóng)業(yè)固體廢棄物的細黃鏈霉菌固體發(fā)酵制備的微生態(tài)菌劑可以用于開發(fā)植物病害真菌的生防微生態(tài)肥料,這在植物病害防治等農(nóng)業(yè)領域具有非常廣闊的應用前景。綜上所述,本論文初步探索了細黃鏈霉菌株AMYa-008的固體發(fā)酵工藝和孢子保存方法,使其產(chǎn)孢能力強,且保存時間更長。這為今后將細黃鏈霉菌株AMYa-008開發(fā)成農(nóng)用生防微生態(tài)制劑奠定了基礎。同時,開發(fā)出的生防微生態(tài)益生菌劑,能夠通過改變土壤中菌群結(jié)構(gòu)的多樣性和豐富度來改善植物的生長環(huán)境,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上能夠起到防病保苗、促進生長、提高產(chǎn)量以及減少化肥的使用等功效,具有廣闊的開發(fā)和應用前景。
【學位單位】：齊魯工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：TQ920.6;TQ455
【部分圖文】：

實驗研究技術(shù)路線

圖 2.1 Streptomyces microflavusAMYa-008 菌落形態(tài)(a)和菌絲體(b)及孢子形態(tài)(c)圖 2.2 細黃鏈霉菌（Streptomyces microflavus）16S rDNAPCR 片段細黃鏈霉菌 S. microflavus AMYa-008 平板菌落狀態(tài)如圖 2.1（a）所示，從圖中可S. microflavus AMYa-008 菌落形態(tài)以中間向四周輻射，表面有褶皺，菌落邊緣不光滑菌落顏色從菌齡短的白色到成熟的淡黃色。菌株的菌絲體和孢子形態(tài)如圖 2.1（b、M 1 2M1000bp1500bp

霉菌（Streptomyces microflavus AMYa-008 平板菌落落形態(tài)以中間向四周輻成熟的淡黃色。菌株的發(fā)育良好的分枝菌絲，養(yǎng)時，菌液會變渾濁，鏈霉菌 S. microflavusAM一，無拖尾現(xiàn)象，說明 的理論值 1400bp 左右續(xù)的測序?qū)嶒�。�?AMYa-008 與細黃鏈in 173340 種間的相似性HBUM174884 同源相似并將其命名為細黃鏈霉

【參考文獻】

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本文編號：2821916