在人體的正常代謝中,將產(chǎn)生生物活性自由基。過量的自由基或過慢的自由基清除可導致加速衰老過程并誘發(fā)炎癥,免疫紊亂,惡性腫瘤和其他疾病。人工抗氧化劑通常有副作用,長期攝入可導致一系列疾病,如肝損傷和腫瘤等。海洋生物蛋白源的抗氧化肽可有效的消除內源和外源自由基物質,且具有品種多、副作用小等特點,有望成為安全高效的天然抗氧化劑。長蛇鯔,為廣西北部灣經(jīng)濟魚類之一,長蛇鯔屬,狗母魚科,年產(chǎn)量較大,作為一種海洋不易保存的魚類,在加工過程中經(jīng)常被當成廢棄物或低值飼料,這大大降低了長蛇鯔魚的使用價值,并且造成了一定的環(huán)境污染。以長蛇魷魚肉蛋白為原料制備生物活性肽,可為工業(yè)化長蛇鯔魚資源的產(chǎn)品開發(fā)提供理論依據(jù)。利用六種不同的商業(yè)化蛋白酶,水解長蛇鯔魚肉蛋白,以1,2-二苦基-2-三硝基苯亞胼基(DPPH·)、沒食子酚超氧(O2-·)自由基清除率和Fe3+還原能力的活性為指標,探討不同酶水解條件下,不同蛋白酶的水解產(chǎn)物的抗氧化性能。結果表明,胰蛋白酶酶解產(chǎn)物水解度(DH)為13%時,蛋白濃度為1 mg/L的酶解產(chǎn)物,對1,2-二苦基-2-三硝基苯亞肼基(DPPH·)、沒食子酚超氧自由基(O2-·)清除和Fe3+還原能力的抗氧化能力綜合性最強,分別為91.41%、19.64%及1.08 Abs,優(yōu)化得到胰蛋白酶酶解長蛇鯔魚肉蛋白的最佳酶解條件為:酶用量為8000U/g、pH為7.0、溫度為40 ℃、底物濃度為25g/L,水解時間為2h。在優(yōu)化的工藝條件下水解長蛇鯔魚肉蛋白,采用凝膠過濾色譜分析水解產(chǎn)物的分子量分布,再使用微濾、超濾對酶解產(chǎn)物進行分離,采用10 KDa和5KDa的超濾膜對酶解產(chǎn)物進行超濾,發(fā)現(xiàn)超濾得到的分子量≤5KDa的長蛇鯔魚肉蛋白酶解產(chǎn)物具有更強的抗氧化活性,蛋白濃度為1 mg/L的透過液,對DPPH·自由基、沒食子酚超氧自由基(O2-·)清除和Fe3+還原能力的活性,分別為94.45%、44.54%及1.32Abs,使用反相高效液相色譜對分子量≤5 KDa的酶解產(chǎn)物進行氨基酸組成分析,其氨基酸種類豐富,含有以下14種氨基酸:天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、蘇氨酸(Thr)、丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、酪氨酸(Tyr)、半胱氨酸(Cys)、纈氨酸(Val)、蛋氨酸(Met)、色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)、異亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、脯氨酸(Pro)。以分子量≤5KDa的長蛇鯔魚酶解產(chǎn)物蛋白為肽源,利用鋅離子螯合率為指標,考察反應肽鋅質量比、反應時間、反應體系pH值和反應時間對螯合率的影響,并進行正交試驗優(yōu)化,得到的最佳組合條件為:肽鋅質量比2:1、溫度45℃、pH=6.5、螯合時間為60min,得到最大螯合率為:89.23%,且肽螯合鋅離子后肽的抗氧化能力增強,在蛋白濃度為1 mg/L時,肽鋅螯合物對DPPH·自由基、超氧(O2--)自由基清除率和Fe3+還原能力的抗氧化活性,分別為97.59%、69.13%及1.72Abs。
【學位單位】：廣西大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：TQ936.16
【部分圖文】：

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本文編號：2813163