發(fā)布時間：2020-07-30 12:57

【摘要】：叉開網(wǎng)翼藻(Dictyopteris divaricata)為褐藻門網(wǎng)地藻科海藻,廣泛分布于我國黃海與東海海岸,是功能食品和化妝品綠色原料的優(yōu)質(zhì)來源。國內(nèi)外學(xué)者對叉開網(wǎng)翼藻的研究較少,其水提物的成分分析及活性檢測尚未有文獻(xiàn)報道。本實驗采用響應(yīng)面法對熱水提取叉開網(wǎng)翼藻多糖(Dictyopteris divaricata sulfated polysaccharides,DDSP)的條件進(jìn)行優(yōu)化,并對多糖提取物的理化特性和生物活性進(jìn)行研究,主要研究如下:(1)叉開網(wǎng)翼藻多糖提取條件優(yōu)化采用水提醇沉法提取叉開網(wǎng)翼藻多糖,在單因素實驗的基礎(chǔ)上利用響應(yīng)面優(yōu)化法優(yōu)化提取條件(液料比、提取時間、提取溫度)。優(yōu)化后的叉開網(wǎng)翼藻多糖最優(yōu)提取條件為:液料比110mL/g、提取時間6h、提取溫度100℃,得到多糖實際提取率為3.05%,比優(yōu)化前提高了9.3%。(2)叉開網(wǎng)翼藻多糖的結(jié)構(gòu)鑒定通過紅外光譜、氣相色譜、葡聚糖凝膠色譜柱層析等現(xiàn)代色譜、光譜技術(shù),結(jié)合酸水解、高碘酸氧化和Smith降解等方法進(jìn)行多糖的結(jié)構(gòu)鑒定。紅外光譜在4000-500cm~(-1)波長范圍對叉開網(wǎng)翼藻多糖進(jìn)行掃描后發(fā)現(xiàn)其含有O-H鍵、C-H鍵、C=O鍵、硫酸基團(tuán)和吡喃糖環(huán)等多糖特征峰。多糖糖腈乙酸酯衍生物的氣相結(jié)果顯示,叉開網(wǎng)翼藻多糖由巖藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖五種單糖以相對摩爾比4.45:2.74:1.00:2.94:1.35的比例組成。經(jīng)比色法檢測,叉開網(wǎng)翼藻多糖中的糖醛酸含量33.7%,硫酸基團(tuán)含量6.0%,利用SephadexG-100葡聚糖凝膠柱測得叉開網(wǎng)翼藻多糖相對分子量58.05KDa。結(jié)合高碘酸氧化反應(yīng)和Smith降解結(jié)果發(fā)現(xiàn),叉開網(wǎng)翼藻多糖的主鏈主要以1,3-糖苷鍵連接,且?guī)r藻糖存在1,3-和1,6-糖苷鍵型。(3)叉開網(wǎng)翼藻多糖生物活性分析通過檢測叉開網(wǎng)翼藻多糖對DPPH和羥基自由基的清除能力來評估其抗氧化活性,利用CCK-8法以及Griess試劑法研究多糖對小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞增殖和NO分泌的影響,最后結(jié)合叉開網(wǎng)翼藻多糖對超氧自由基的清除能力以及酪氨酸酶抑制活性判斷其美白防護(hù)能力�？寡趸瘜嶒灲Y(jié)果顯示,叉開網(wǎng)翼藻具有抗氧化活性,當(dāng)多糖濃度為0.5mg/mL時,其DPPH清除率為67%。與DPPH清除實驗相比,叉開網(wǎng)翼藻多糖對羥自由基的清除能力較弱,當(dāng)多糖濃度為5mg/mL時,其羥自由基清除率為20.2%。叉開網(wǎng)翼藻多糖能夠顯著促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞的增殖和NO分泌,對酪氨酸酶存在競爭性抑制。綜上所述,叉開網(wǎng)翼藻多糖是一種較為理想的天然生物大分子,其良好的抗氧化活性、潛在的免疫調(diào)節(jié)能力以及顯著的酪氨酸酶抑制活性不僅為叉開網(wǎng)翼藻的綜合利用提供了依據(jù),還為功能食品以及綠色化妝品原料提供了新的來源。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TQ914.2;TQ281
【圖文】：

圖 3.2 葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 3.2 The standard curve of glucuronic acid圖 3.3 硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 3.3 The standard curve of sodium sulphate

26圖 3.3 硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 3.3 The standard curve of sodium sulphate組成分析及相對分子量檢測翼藻多糖的單糖組成利用其糖腈乙酸酯衍生物進(jìn)行氣相種標(biāo)準(zhǔn)單糖的氣相色譜圖進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)（圖 3.4A 和 是一種褐藻糖膠，由巖藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半爾比 4.45:2.74:1.00:2.94:1.35 的比例組成，其中巖藻糖是糖、木糖、半乳糖和甘露糖，這與其他研究人員報道的褐

清除實驗結(jié)果進(jìn)行分析，叉開網(wǎng)翼藻多糖對人體含量較高的活性氧自由基的體清除能力較低，還需要進(jìn)一步的體內(nèi)抗氧化實驗來驗證其抗氧化能力。4.4.3.2 酪氨酸酶抑制活性酪氨酸酶是人體產(chǎn)生黑色素的主要限速酶，由于酪氨酸酶抑制劑能直接抑酪氨酸酶活性，常常被當(dāng)作美白劑添加到美白化妝品中。但酪氨酸酶抑制劑的用不止于此，酪氨酸酶抑制劑還可以添加到食品中延長食品的貯藏期或者應(yīng)用農(nóng)業(yè)防蟲除害方面[106]。實驗結(jié)果顯示，叉開網(wǎng)翼藻多糖對酪氨酸酶有抑制作用在 10-50μg/mL 濃度范圍內(nèi)，抑制活性先升高后降低，在 20μg/mL 時達(dá)到最高47.6%（圖 4.3B）。在正常情況下，激活酪氨酸酶酶活會使人體內(nèi)黑色素產(chǎn)量加，進(jìn)而導(dǎo)致皮膚變黑，嚴(yán)重時可能造成色素沉著，形成黃褐斑等常見的皮膚病。酪氨酸酶在氧自由基存在的情況下將酪氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楹谏豙107]，人體內(nèi)存的氧自由基多為超氧自由基和羥自由基，根據(jù)之前的抗氧化實驗結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)叉開網(wǎng)翼藻多糖對超氧自由基和羥自由基的清除能力較弱，所以其對酪氨酸酶抑制機(jī)理主要是與酪氨酸酶的競爭性抑制[34]，而不是與氧自由基結(jié)合。(B)

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6 徐年軍,范曉,韓麗君,嚴(yán)小軍,曾呈奎;山東沿海海藻抗腫瘤活性的篩選[J];海洋與湖沼;2001年04期

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本文編號：2775572