【摘要】：N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)是一種重要的氨糖,在人體及微生物等各類生物中發(fā)揮著重要作用,被廣泛應用于食品、藥品及化妝品行業(yè)。目前GlcNAc以化學法生產為主,但是化學法的主要原料是蝦蟹等甲殼類動物的外骨骼,這類原料存在產地和季節(jié)的限制等問題,同時化學法生產GlcNAc過程中會造成比較嚴重的環(huán)境污染。出于這些限制因素的考慮,用生物法合成GlcNAc成為一種新選擇。生物法合成GlcNAc的原料一般以生物質為主,且生產過程對環(huán)境污染小,具有較大優(yōu)勢。本文選用了谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacteriumglutamicum)為對象進行代謝路徑改造合成GlcNAc。本論文的主要目的是通過對GlcNAc合成途徑的優(yōu)化來提高CorynebacteriumglutamicumATCC13032 GlcNAc 產量。本論文主要進行了以下工作:(1)通過過表達基因glnA對谷氨酸棒狀桿菌代謝途徑中加強谷氨酰胺合成途徑表達,增強GlcNAc氨基供體谷氨酰胺合成,重組菌C.gW-SG的GlcNAc產量達到2.34 g/L。通過敲除基因poxB對副產物乙酸合成途徑阻斷并將GlcNAc合成途徑中關鍵酶基因GNA1進行整合,重組菌C.gWBG-SGA的 GlcNAc 產量達到 2.62 g/L。(2)通過對GlcNAc途徑主要競爭途徑中的關鍵基因pfkA進行弱化,采用了 anti-sense RNA和CRISPRi兩種方式進行。弱化效果最好的是通過anti-sense RNA進行弱化的菌株C.gWBG-SGAA1的GlcNAc產量達到3.11 g/L。(3)確定了菌株C.gWBG-SGAA41發(fā)酵過程中誘導劑最優(yōu)添加時間和添加濃度分別為接種后2 h和0.8 mMIPTG。對發(fā)酵培養(yǎng)基中重要成分進行濃度優(yōu)化,當葡萄糖濃度為85 g/L,玉米漿濃度為40 g/L,尿素濃度為5 g/L時最為合適,菌株C.gWBG-SGAA1達到4.48 g/L。
【圖文】：

圖１－２邋ＧｌｃＮＡｃ應用逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋Ｔｈｅ邋ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＧｌｃＮＡｃ逡逑

第一章緒論人使用了一系列代謝工程策略對大腸桿菌合成ＧｌｃＮＡｃ的代謝了一株高產ＧｌｃＮＡｃ的基因工程菌。對大腸桿菌中關鍵酶ｇｌｍＳ進抑制減少從而提高ＧｌｃＮＡｃ積累量。異源表達來自釀酒酵母的Ｇ（編碼），將ＧｌｃＮ轉化成更為穩(wěn)定的ＧｌｃＮＡｃ。在此基ＮＡｃ的消耗基因五以及操縱子ｗａｎＸＫＺ，用構建ｃｏ／／７１０７－１８進行發(fā)酵，發(fā)酵７２邋ｈ的ＧｌｃＮＡｃ／ＧｌｃＮ達到１１０邋ｇ／Ｌ［８】。取合適的培養(yǎng)基，，ＤＯ值，葡萄糖添加策略，用菌株Ｅｃｏ／ｉ－ｇ／ｗ＾－１６ｈ的ＧｌｃＮＡｃ／ＧｌｃＮ達到７２．８９邋ｇ／Ｕ３３］。各類菌株的ＧｌｃＮＡｃ／Ｇｌ３。經過基因工程改造的大腸桿菌生產ＧｌｃＮＡｃ的能力得到了很大ｃ和ＧｌｃＮ主要用于醫(yī)藥、食品、化妝品領域，大腸桿菌在發(fā)酵限制產品的推廣應用。逡逑
【學位授予單位】：北京化工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：TQ929

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 黃壯霖;賴貝;李岳亮;梁一;;免疫細胞中O-GlcNAc修飾研究進展[J];中國醫(yī)藥生物技術;2018年06期

2 ;種康院士團隊揭示植物O-GlcNAc糖基化介導表觀遺傳修飾調控發(fā)育的新機制[J];蔬菜;2018年10期

3 孫冊;;Asn-連接的寡糖與腫瘤的發(fā)生和轉移的相關性[J];生命的化學(中國生物化學會通訊);1989年05期

4 李楠;李忻琳;韋立紅;林忠;;蛋白質O-GlcNAc糖基化修飾的生物合成途徑與檢測方法[J];中華婦幼臨床醫(yī)學雜志(電子版);2018年06期

5 Mitsutaka Ogawa;Koichi Furukawa;Tetsuya Okajima;;Extracellular O-linked β-N-acetylglucosamine: Its biology and relationship to human disease[J];World Journal of Biological Chemistry;2014年02期

6 高婧;施美霞;寸鏡芬;趙舒融;黃春榮;許艷華;;O-GlcNAc修飾調控軟骨及成骨分化的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2018年03期

7 于田;金東日;;新型N-糖鏈受體氘代MPDPZ-Boc-Asn-GlcNAc的合成及其受體性能[J];延邊大學學報(自然科學版);2015年01期

8 汪素芳;韓榮弼;金東日;;新型N-連接糖鏈分析用試劑MMDPZ-Boc-Asn-GlcNAc的合成[J];化學試劑;2012年03期

9 李娟;王鳳山;;O位N-乙酰葡糖胺修飾異常與胰島素抵抗[J];生命的化學;2009年03期

10 馬春;張鑫磊;楊虎林;翟宇宏;張瑋;;蛋白質O-GlcNAc糖基化修飾在婦科腫瘤中的研究進展[J];癌癥進展;2018年11期

相關會議論文 前10條

1 邵文亞;劉洪濤;張麗華;李煌元;;肥胖小鼠肝臟O-GlcNAc糖基化蛋白質組定性定量分析[A];2018環(huán)境與健康學術會議--精準環(huán)境健康：跨學科合作的挑戰(zhàn)論文匯編[C];2018年

2 陳興;;O-GlcNAc動態(tài)糖基化的化學標記和定量分析[A];第十屆全國化學生物學學術會議報告摘要集[C];2017年

3 Wei Qin;Pinou Lv;Xinqi Fan;Baiyi Quan;Yuntao Zhu;Ke Qin;Ying Chen;Chu Wang;Xing Chen;;Quantitative time-resolved chemoproteomics reveals stable O-GlcNAc regulates box C/D snoRNP biogenesis[A];第十屆全國化學生物學學術會議論文摘要集（墻報）[C];2017年

4 ;A novel coupled-enzyme method for O-linked GIcNAc transferase activity assay[A];第六屆全國化學生物學學術會議論文摘要集[C];2009年

5 劉華東;李艷梅;;UDP-GIcNAc轉移酶(OGT)的結構及作用機理[A];第七屆全國酶學學術討論會論文摘要集[C];2004年

6 周橋;馮興梅;;OGT調節(jié)C/EBPβ的O-GlcNAc修飾在牙髓干細胞成骨分化中的作用[A];中華口腔醫(yī)學會第九次全科口腔醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2018年

7 王s

本文編號：2702812