植物的整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程都面臨著各種各樣的環(huán)境變化,為了應(yīng)對(duì)不同的逆境脅迫,植物進(jìn)化出一套高效的防御機(jī)制,形成了高度敏感的逆境感知體系以及高效的應(yīng)答機(jī)制,而轉(zhuǎn)錄因子在植物對(duì)非生物脅迫的應(yīng)答響應(yīng)中起著重要的作用。作為植物轉(zhuǎn)錄因子中最大的家族之一,MYB轉(zhuǎn)錄因子幾乎參與了植物所有的生命活動(dòng),包括初生和次生代謝、細(xì)胞周期和細(xì)胞分化及生物和非生物脅迫響應(yīng)。梅花是重要的園林觀賞植物,但較弱的低溫抗性限制其在北方的露地栽培。本文以’雪梅’為主要試驗(yàn)材料,利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)PmMYBs轉(zhuǎn)錄因子家族在低溫脅迫下的表達(dá)模式,克隆了 12個(gè)PmMYBs轉(zhuǎn)錄因子,并構(gòu)建其超量表達(dá)載體。通過(guò)異源轉(zhuǎn)化擬南芥,鑒定了其在非生物脅迫下的抗性。主要結(jié)果如下:1、’雪梅’ 27個(gè)R2R3-MYB基因中有17個(gè)基因在低溫處理12h內(nèi)迅速響應(yīng)低溫。5個(gè)’雪梅’1R-MYB基因中,Pm000420在低溫處理初期(3h)表達(dá)明顯受到抑制,其他4個(gè)基因?qū)Φ蜏靥幚聿幻舾?比較不同品種間PmMYBs的表達(dá)發(fā)現(xiàn),PmMYBs基因在3個(gè)品種間的表達(dá)模式較為一致,但抗寒性強(qiáng)的’小玉蝶’和’豐后’的MYB基因的表達(dá)豐度明顯低于抗寒能力...

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１植物低溫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)（引自劉輝等２０１４）??Ｆｉｇ．?１?Ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｃｏｌｄ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ?ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｎｅｔｗｏｒｋ?ｉｎ?ｐｌａｎｔ??

而受ＭＹＢ１５、ＭＹＢＳ３、ＺＡＴ１２、ＰＩＦ４／７、ＷＲＫＹ３４及ＥＩＮ３等轉(zhuǎn)錄因子的負(fù)調(diào)控。??除依賴ＣＢＦ的低溫調(diào)控途徑外，還存在一些轉(zhuǎn)錄因子，如ＪＥＲＦ３、ＷＲＫＹ１９／７６、??ＮＡＣ１／２及ＳＡＰ１／８等通過(guò)不依賴于ＣＢＦ的途徑調(diào)控植物低溫應(yīng)答（圖１）。?????￣￣....

圖２利用ＱＲＴ－ＰＣＲ分析低溫脅迫下的表達(dá)量變化??注：數(shù)據(jù)以為內(nèi)參進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化定量，以未低溫處理樣本為參照，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表??示（ｍｅａｎ?土?ＳＥ）（ｎ?＝?３）

個(gè)基因（Ｐｗ如５３３２、尸ｗ似３０２０、Ｐｗ犯３７Ｓ６?和??在低溫處理的６小時(shí)內(nèi)迅速響應(yīng)低溫脅迫，并在３ｈ－１２ｈ內(nèi)達(dá)到表達(dá)高峰，但??ＰｍＷ心７２出現(xiàn)上調(diào)表達(dá)與表達(dá)譜結(jié)果相反（圖２Ａ）；?６個(gè)基因（Ｐｗ即Ｗ９９、Ｐｗ０２＊／３％、??戶》２犯６３３彳、ＰｗＯ２０ｉ（Ｗ、Ｐｗ０....

圖3不同梅花品種I}YH轉(zhuǎn)錄因子在低溫脅迫下的表達(dá)

Ｆｉｇ．?３?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｐａｔｔｅｒｎ?ｏｆ?ＰｍＭＹＢｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｕｌｔｉｖａｒｓ?ｏｆ?Ｐ．?ｍｕｍｅ?ｕｎｄｅｒ?ｃｏｌｄ?ｓｔｒｅｓｓ??１８??

圖５?３５Ｓ：：?質(zhì)粒的酶切檢測(cè)??注？？?Ｍ，?ＤＮＡ?分子量標(biāo)準(zhǔn)

為進(jìn)一步分析這些乃基因的生物學(xué)功能，我們分別構(gòu)建了這些基因的超??量表達(dá)載體。將測(cè)序正確的序列經(jīng)雙酶切連接到超量表達(dá)載體ｐＣＡＭＢＩＡ２３００ｓ上，??進(jìn)行ＰＣＲ檢測(cè)，抽提質(zhì)粒經(jīng)過(guò)雙酶切驗(yàn)證（圖５），證明各基因己經(jīng)插入目的載體??中。其重組質(zhì)粒分別命名為３５Ｓ：：?糾７９９、３５....

本文編號(hào)：3906145