我國傳統(tǒng)名花之一的中國水仙(Narcissus tazetta L.Var.chinensis Roem.),為多年生石蒜科多花水仙鱗莖植物的栽培變種,也是福建省的特色花卉。水仙花具有傘型花序,其花葶(花柱)著生多朵小花,與歐洲水仙形成鮮明對照。水仙花小花壽命一般為3-4天,花序頂部順序開放,在開花過程中花葶需要從源器官輸入足量的碳水化合物(蔗糖)及其他的營養(yǎng)成分來提供碳骨架及能量,完成小花開放、香氣合成及生殖細(xì)胞發(fā)育和種子形成等過程。而蔗糖不僅是能量的載體,也作為信號分子參與調(diào)節(jié)花的形成、發(fā)育以及生殖過程。為了深入了解水仙花發(fā)育過程糖運輸相關(guān)的分子機制和遺傳控制,我們對一類重要的糖運輸?shù)鞍譙WEET基因家族進(jìn)行了研究。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.利用熒光定量PCR技術(shù),對水仙花芽分化及開花過程中SWEET糖轉(zhuǎn)運蛋白基因進(jìn)行表達(dá)量水平分析。實驗結(jié)果表明越靠近鱗莖內(nèi)部Nt SWEET14和15基因的表達(dá)量相應(yīng)下降,Nt SWEET1a、1b、4b和13則逐步升高,而這些基因在水仙開花開放的四個階段中也都同樣呈現(xiàn)出特定的表達(dá)模式。相較于其他SWEET基因,無論在副冠中還是在花被片中Nt S...

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【學(xué)位級別】：碩士

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縮略詞表
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
    1.2 水仙花鱗莖膨大機理及其儲藏功能
    1.3 水仙花開花性狀的分子機理研究進(jìn)展
    1.4 SWEET糖運輸?shù)鞍椎难芯楷F(xiàn)狀
        1.4.1 SWEET基因的發(fā)現(xiàn)
        1.4.2 SWEET蛋白結(jié)構(gòu)特征
        1.4.3 SWEET基因家族的功能
    1.5 本研究的內(nèi)容及意義
第二章 水仙SWEET家族基因的表達(dá)水平分析
    2.1 材料
        2.1.1 植物種植和樣品采集
        2.1.2 儀器及用具
        2.1.3 試劑
    2.2 方法
        2.2.1 轉(zhuǎn)錄組中SWEET同源基因序列的表達(dá)動態(tài)分析
        2.2.2 Nt SWEET家族基因生物信息學(xué)分析
        2.2.3 總RNA提取及c DNA第一條鏈的合成
        2.2.4 Nt SWEET家族基因q PCR引物設(shè)計及特異性檢測
        2.2.5 實時熒光定量qPCR反應(yīng)體系和程序
        2.2.6 實時熒光定量PCR數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 Nt SWEET家族基因表達(dá)動態(tài)及分子進(jìn)化樹的分析
        2.3.2 總RNA的提取
        2.3.3 水仙花SWEET基因在不同組織部位的表達(dá)分析
    2.4 討論
第三章 水仙SWEET糖轉(zhuǎn)運蛋白家族基因的過表達(dá)載體構(gòu)建
    3.1 材料
        3.1.1 實驗試劑及儀器
        3.1.2 載體及菌株
    3.2 方法
        3.2.1 引物設(shè)計
        3.2.2 目的基因片段的克隆和回收
        3.2.3 Gateway技術(shù)構(gòu)建雙元表達(dá)載體
        3.2.4 重組表達(dá)載體單克隆的檢測
        3.2.5 重組子質(zhì)粒提取及保菌
        3.2.6 凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101
        3.2.7 過表達(dá)重組載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        3.2.8 陽性轉(zhuǎn)化菌株的鑒定及保菌
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 Nt SWEETs基因的克隆與分析
        3.3.2 目的片段連接入門載體
        3.3.3 LR反應(yīng)構(gòu)建目的表達(dá)載體
        3.3.4 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化GV3101農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞
    3.4 討論
第四章 水仙SWEET糖轉(zhuǎn)運蛋白家族成員的亞細(xì)胞定位分析
    4.1 材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 儀器和試劑
        4.1.3 實驗所需溶液的配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 本氏煙草的種植
        4.2.2 煙草葉片的侵染與取樣
        4.2.3 煙草葉片侵染液的配制
        4.2.4 臨時裝片的制備
    4.3 結(jié)果與分析
    4.4 討論
第五章 水仙SWEET糖轉(zhuǎn)運蛋白基因的酵母互補表達(dá)載體構(gòu)建及功能驗證
    5.1 材料
    5.2 試劑與儀器
        5.2.1 實驗試劑
        5.2.2 實驗儀器
    5.3 方法
        5.3.1 引物序列的設(shè)計
        5.3.2 從連接目的基因的質(zhì)粒中擴增片段
        5.3.3 目的基因片段的酶切純化及有膠回收
        5.3.4 表達(dá)載體p DRTXa-Nt SWEET的構(gòu)建
        5.3.5 陽性菌株的篩選檢測
        5.3.6 培養(yǎng)與轉(zhuǎn)化酵母所需培養(yǎng)基的配制
        5.3.7 重組載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母菌株EBYVW4000感受態(tài)細(xì)胞
        5.3.8 酵母重組表達(dá)載體p DRTXa-Nt SWEET對不同糖底物轉(zhuǎn)運吸收功能
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 pDRTXa-Nt SWETs酵母功能互補表達(dá)載體構(gòu)建
        5.4.2 Nt SWEET基因在酵母底物吸收互補中的功能
    5.5 討論
第六章 水仙離體培養(yǎng)研究及愈傷組織中SWEET基因的表達(dá)分析
    6.1 材料
    6.2 試劑與儀器
        6.2.1 試劑
        6.2.2 儀器及用具
    6.3 方法
        6.3.1 外植體的預(yù)處理和消毒
        6.3.2 中國水仙離體組織再生培養(yǎng)條件的篩選
        6.3.3 數(shù)據(jù)計算分析
        6.3.4 水仙SWEET基因家族在不同階段愈傷組織的表達(dá)變化
    6.4 結(jié)果與分析
        6.4.1 水仙外植體消毒條件的探索及污染、褐化情況
        6.4.2 水仙愈傷組織的誘導(dǎo)增殖和不定芽分化
        6.4.3 鱗莖片愈傷組織的誘導(dǎo)和分化
        6.4.4 子房愈傷組織的誘導(dǎo)和分化
        6.4.5 水仙不同愈傷組織階段中SWEET基因家族成員的表達(dá)特征
    6.5 討論
第七章 總結(jié)與展望
    7.1 主要結(jié)論
    7.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3875076