藍莓是重要經(jīng)濟作物,近年來,在山東、遼寧等北方地區(qū)種植面積不斷擴大。由于藍莓根系不發(fā)達、吸收養(yǎng)分能力差,喜好偏酸土壤環(huán)境、適宜土壤pH為4.5-5.5,制約了藍莓生產(chǎn)。植物根際促生菌(Plant Growth-Promoting Rhizobacteria,PGPR)具有促進植物根系生長發(fā)育、調(diào)控和改善根際土壤環(huán)境、防治土傳病害等多種作用。本研究從藍莓根際篩選生長素產(chǎn)生菌、蛋白酶產(chǎn)生菌、產(chǎn)酸菌及溶磷細菌等,并進行鑒定;通過營養(yǎng)缽苗和穴盤苗盆栽試驗驗證其促生效果;運用高通量測序技術(shù)探究BIA070和BPR176菌株對根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響;對BIA070菌株進行GFP標記,探究其根際定殖能力;研究產(chǎn)酸菌對土壤pH的影響。為藍莓專用PGPR微生物肥料研制與推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。從藍莓根際篩選到生長素產(chǎn)生菌14株、蛋白酶產(chǎn)生菌12株、溶磷細菌6株。通過穴盤苗試驗和營養(yǎng)缽苗試驗,初步確定了10株促生效果較好的菌株,鑒定結(jié)果顯示:BIA032屬于Leucobacter aridicollis,BIA044、BIA088、BPR082、BPR088、BPR176屬于阿氏芽孢桿菌(Bacillus...

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【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 研究背景
        1.1.1 藍莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀
        1.1.2 藍莓栽培中存在的問題
    1.2 植物根際促生菌在藍莓土壤改良中的應(yīng)用前景
        1.2.1 微生物在藍莓中的應(yīng)用研究進展
        1.2.2 植物根際促生菌（PGPR）
            1.2.2.1 PGPR的發(fā)展歷史
            1.2.2.2 PGPR作用機制
            1.2.2.3 PGPR的應(yīng)用
    1.3 土壤肥力
        1.3.1 土壤酶
        1.3.2 土壤養(yǎng)分
        1.3.3 土壤微生物群落結(jié)構(gòu)
    1.4 本研究的立項依據(jù)、研究內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.4.1 立項依據(jù)
        1.4.2 研究內(nèi)容
        1.4.3 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 主要儀器
    2.2 培養(yǎng)基
        2.2.1 菌株發(fā)酵、培養(yǎng)基本培養(yǎng)基
        2.2.2 生長素產(chǎn)生菌篩選培養(yǎng)基
        2.2.3 溶磷菌篩選培養(yǎng)基
        2.2.4 蛋白酶產(chǎn)生菌篩選培養(yǎng)基
        2.2.5 產(chǎn)酸菌篩選培養(yǎng)基
    2.3 方法
        2.3.1 根際促生細菌的分離、純化
        2.3.2 生長素產(chǎn)生菌的篩選
            2.3.2.1 IAA產(chǎn)生菌初篩
            2.3.2.2 細菌分泌IAA定量測定
        2.3.3 溶磷菌的篩選
            2.3.3.1 溶磷菌初篩
            2.3.3.2 溶磷菌發(fā)酵液有效磷含量測定
        2.3.4 蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選
            2.3.4.1 蛋白酶產(chǎn)生菌初篩
            2.3.4.2 蛋白酶產(chǎn)生菌復(fù)篩
        2.3.5 根際促生菌菌種鑒定
            2.3.5.1 菌株形態(tài)特征及生理生化特征測定
            2.3.5.2 細菌基因組DNA的提取
            2.3.5.3 16S rDNA擴增
        2.3.6 藍莓根際促生菌促生效果驗證
            2.3.6.1 試驗設(shè)計
            2.3.6.2 植株生長指標測定
            2.3.6.3 植株葉片相關(guān)指標測定
            2.3.6.4 植株養(yǎng)分測定
            2.3.6.5 根際土壤酶活及養(yǎng)分測定
            2.3.6.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
        2.3.7 促生菌對根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響
        2.3.8 促生菌根際定殖能力研究
            2.3.8.1 GFP標記
            2.3.8.2 標記菌株質(zhì)粒穩(wěn)定性測定
            2.3.8.3 盆栽試驗探究BIA070根際定殖能力
        2.3.9 藍莓根際產(chǎn)酸菌的篩選
            2.3.9.1 土壤樣品采集
            2.3.9.2 產(chǎn)酸菌的分離純化
            2.3.9.3 產(chǎn)酸能力測定
            2.3.9.4 產(chǎn)酸菌菌種鑒定
            2.3.9.5 高效液相色譜測定有機酸種類及含量
            2.3.9.6 土壤培養(yǎng)試驗
3 結(jié)果與分析
    3.1 藍莓根際促生菌的篩選
        3.1.1 生長素產(chǎn)生菌
        3.1.2 溶磷菌
            3.1.2.1 溶磷菌初篩
            3.1.2.2 溶磷菌發(fā)酵液有效磷含量
        3.1.3 蛋白酶產(chǎn)生菌
    3.2 藍莓根際促生菌菌種鑒定
        3.2.1 菌體及菌落形態(tài)
        3.2.2 促生菌生理生化特征
        3.2.3 16SrDNA基因序列分析
    3.3 藍莓根際促生菌促生效果
        3.3.1 藍莓營養(yǎng)缽苗試驗調(diào)查
            3.3.1.1 生長素產(chǎn)生菌
            3.3.1.2 蛋白酶產(chǎn)生菌
            3.3.1.3 溶磷菌
            3.3.1.4 營養(yǎng)缽苗試驗
        3.3.2 穴盤苗試驗調(diào)查
            3.3.2.1 2015 年7月 6 日調(diào)查結(jié)果
            3.3.2.2 2015 年7月 30 日調(diào)查結(jié)果
            3.3.2.3 2015 年11月 12 日調(diào)查結(jié)果
        3.3.3 第二次營養(yǎng)缽苗試驗結(jié)果
            3.3.3.1 植株生長狀況
            3.3.3.2 土壤理化性質(zhì)
    3.4 促生菌對藍莓根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響
        3.4.1 細菌群落結(jié)構(gòu)分析
            3.4.1.1 OTU聚類
            3.4.1.2 Alpha多樣性分析
            3.4.1.3 群落結(jié)構(gòu)分析
            3.4.1.4 群落功能基因預(yù)測分析
        3.4.2 真菌群落結(jié)構(gòu)分析
            3.4.2.1 OTU聚類
            3.4.2.2 Alpha多樣性分析
            3.4.2.3 群落結(jié)構(gòu)分析
    3.5 藍莓根際促生菌BIA070的根際定殖能力研究
    3.6 藍莓根際產(chǎn)酸菌篩選
        3.6.1 初篩
        3.6.2 發(fā)酵液pH測定
        3.6.3 菌種鑒定
            3.6.3.1 菌落形態(tài)特征
            3.6.3.2 產(chǎn)酸菌生理生化特征
            3.6.3.3 產(chǎn)酸菌 16S rDNA序列比對
        3.6.4 發(fā)酵液有機酸種類及含量
            3.6.4.1 標樣信息
            3.6.4.2 測定結(jié)果
        3.6.5 產(chǎn)酸菌土壤培養(yǎng)
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號：3846323