霜霉病是黃瓜葉片主要病害之一,自1868年在古巴被發(fā)現(xiàn)以來,現(xiàn)已危害全球70多個國家的黃瓜生產(chǎn)。目前,對于黃瓜霜霉病抗性相關(guān)的研究較多,雖取得了一定進展,但未有重大突破。已經(jīng)報道的QTL位點分散在chr1、chr5和chr6上,缺少緊密連鎖且簡便實用的分子標記,并且由于育種實踐中不同種質(zhì)資源的遺傳背景存在差異,限制了這些標記在育種中的應用。另外,抗病基因或QTL的精細定位和圖位克隆進展緩慢,至今尚未見到成功克隆黃瓜霜霉病抗病基因或QTL并完成功能驗證的報道,無法滿足在育種實踐中輔助選擇和種質(zhì)創(chuàng)新的需要。如何進一步深入挖掘黃瓜抗霜霉病基因,加速抗病分子育種進程,成為黃瓜抗病育種亟待解決的課題。本研究從以下兩個方面開展工作:一方面,以抗性基因為研究目的。利用高抗黃瓜霜霉病的純合自交系K8和感病材料新泰密刺選系K18為親本,構(gòu)建含有86個單株的RIL群體,分別在苗期、成株期對群體進行抗病性鑒定,結(jié)合構(gòu)建的分子標記遺傳圖譜,對苗期和成株期的霜霉病抗性進行相關(guān)性分析,對黃瓜霜霉病抗性基因進行QTL定位,并在定位區(qū)域內(nèi)進行候選基因分析,確定11個與抗性相關(guān)的基因,在兩親本間對其進行克隆和序列分析。...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
第一章 文獻綜述
    1.1 黃瓜霜霉病及其抗性基因定位研究概況
        1.1.1 黃瓜霜霉菌簡介
        1.1.2 黃瓜霜霉病菌的小種分化
        1.1.3 黃瓜霜霉病菌侵染過程的研究
        1.1.4 黃瓜霜霉病的抗性機理
        1.1.5 黃瓜霜霉病抗病性鑒定方法
        1.1.6 黃瓜霜霉病發(fā)病規(guī)律及防治方法
        1.1.7 抗性遺傳規(guī)律研究
        1.1.8 黃瓜霜霉病苗期與成株期抗性相關(guān)性分析的研究
        1.1.9 抗性基因遺傳定位的研究
    1.2 黃瓜霜霉病抗病基因挖掘的研究
        1.2.1 植物病原互作模式的研究進展
        1.2.2 植物抗病基因的類型
        1.2.3 黃瓜抗霜霉病基因的同源克隆
    1.3 黃瓜霜霉病感病基因挖掘的研究
        1.3.1 感病基因的介紹
        1.3.2 植物感病基因的研究
        1.3.3 黃瓜感病基因的研究
    1.4 本研究的目的意義與技術(shù)路線
        1.4.1 研究目的與意義
        1.4.2 技術(shù)路線
第二章 黃瓜霜霉病抗病基因的QTL分析
    1 引言
    2 試驗材料與方法
        2.1 試驗材料
            2.1.1 親本
            2.1.2 分離群體
        2.2 霜霉病抗病性鑒定
            2.2.1 材料種植及發(fā)病條件
                2.2.1.1 成株期種植及發(fā)病條件
                2.2.1.2 苗期種植及發(fā)病條件
            2.2.2 病情調(diào)查
                2.2.2.1 成株期病情調(diào)查
                2.2.2.2 苗期病情調(diào)查
            2.2.3 病情指數(shù)計算
            2.2.4 黃瓜霜霉病苗期與成株期抗性相關(guān)性分析
        2.3 構(gòu)建SSR分子連鎖圖譜
            2.3.1 黃瓜葉片總DNA的提取
            2.3.2 SSR分析
                2.3.2.1 引物來源
                2.3.2.2 尋找多態(tài)性引物及SSR分析
                2.3.2.3 凝膠電泳檢測
            2.3.3 SSR連鎖群的構(gòu)建
        2.4 黃瓜霜霉病抗病基因的QTL分析
        2.5 候選基因分析
        2.6 抗病類候選基因的克隆及分析
        2.7 主要試劑、儀器設備
    3 結(jié)果與分析
        3.1 遺傳群體抗病性鑒定結(jié)果
        3.2 黃瓜霜霉病苗期與成株期抗性相關(guān)分析結(jié)果
        3.3 SSR多態(tài)性分析
        3.4 遺傳圖譜的構(gòu)建
        3.5 黃瓜霜霉病抗性QTL分析
        3.6 主效QTL區(qū)域基因預測
        3.7 與抗病直接相關(guān)的候選基因的克隆及分析
            3.7.1 候選基因的克隆
            3.7.2 序列拼接與分析
                3.7.2.1 Csa5M464830.1 基因結(jié)構(gòu)、生物信息學分析
                3.7.2.2 Csa5M495930.1 基因結(jié)構(gòu)、生物信息學分析
    4 結(jié)論與討論
        4.1 結(jié)論
        4.2 討論
第三章 黃瓜霜霉病感病基因的克隆及特征分析
    1 引言
    2 試驗材料與方法
        2.1 試驗材料
        2.2 試驗材料霜霉病菌苗期接種鑒定
            2.2.1 試驗材料的種植管理
            2.2.2 接種菌液的制備
            2.2.3 接種及相應管理
            2.2.4 病情調(diào)查及病指計算
        2.3 葉片總RNA的提取
        2.4 候選基因的確定
        2.5 候選基因的克隆
            2.5.1 合成c DNA第一條鏈
            2.5.2 克隆目的基因c DNA全長
        2.6 序列比對及基因結(jié)構(gòu)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 試驗材料霜霉病抗性鑒定結(jié)果
        3.2 系統(tǒng)發(fā)育樹分析確定候選基因
        3.3 克隆及序列分析
        3.4 蛋白質(zhì)二級、三級結(jié)構(gòu)的預測
    4 結(jié)論與討論
        4.1 結(jié)論
        4.2 討論
第四章 全文結(jié)論
    1 黃瓜霜霉病抗性QTL定位、候選基因分析和克隆
    2 黃瓜霜霉病感病基因的同源克隆和序列分析
參考文獻
附錄
作者簡歷
Abstract



本文編號：3776156