歐芹（Petroselinum crispum L.）,又名洋芫荽和法國香菜等,屬于傘形科歐芹屬一二年生草本植物。作為香辛蔬菜,食用嫩葉,鮮根、莖汁可供藥用。非生物脅迫,包括溫度（高溫、低溫）、鹽害和干旱等,是導(dǎo)致歐芹減產(chǎn)的重要因素之一。分離歐芹相關(guān)的抗性基因,篩選與抗性性狀緊密連鎖的分子標(biāo)記,對于歐芹抗逆品種的選育有重要的意義。qRT-PCR是定量基因轉(zhuǎn)錄水平的主要方法之一,需要使用內(nèi)參基因（Reference gene）校正目標(biāo)基因的表達(dá)量。本實(shí)驗(yàn)克隆了歐芹相關(guān)內(nèi)參基因的部分片段,使用qRT-PCR技術(shù)建立每個(gè)基因相對應(yīng)實(shí)時(shí)熒光定量的方法,研究了不同逆境條件下內(nèi)參基因表達(dá)的穩(wěn)定性。同時(shí),為進(jìn)一步驗(yàn)證在本研究中確定的內(nèi)參基因,還對pcDREB1基因在歐芹高溫脅迫下的表達(dá)譜進(jìn)行了研究。具體研究結(jié)果如下:（1）以歐芹葉片cDNA為模板,篩選了 8條內(nèi)參基因（GAPDH、ACTIN、eIF-4α、SAND、UBC、TIP41、EF-1α和TUB）的中間片段。與其他物種的同源基因進(jìn)行BLAST比對,結(jié)果顯示堿基相似度均在80%以上。（2）利用qRT-PCR技術(shù)建立了上述8條基因相對應(yīng)的實(shí)時(shí)定... 

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 實(shí)時(shí)定量PCR介紹
        1.1.1 實(shí)時(shí)定量PCR研究進(jìn)展
        1.1.2 實(shí)時(shí)定量PCR的一般應(yīng)用
        1.1.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的使用標(biāo)準(zhǔn)
    1.2 常用內(nèi)參基因及其應(yīng)用
    1.3 植物與非生物脅迫
    1.4 植物激素與脅迫
    1.5 基因穩(wěn)定性分析軟件
        1.5.1 geNorm
        1.5.2 NormFinder
        1.5.3 BestKeeper
    1.6 歐芹內(nèi)參基因篩選研究目的意義及技術(shù)路線
        1.6.1 本研究目的及意義
        1.6.2 本研究的技術(shù)路線
第二章 歐芹相關(guān)內(nèi)參基因的克隆
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 數(shù)據(jù)處理及分析
        2.2.1 歐芹葉片cDNA合成及候選基因的克隆
        2.2.2 候選內(nèi)參基因的序列比對
        2.2.3 歐芹候選內(nèi)參基因特異引物設(shè)計(jì)及特異性檢測
    2.3 討論
第三章 歐芹相關(guān)內(nèi)參基因在不同脅迫下表達(dá)穩(wěn)定性分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 融解曲線結(jié)果分析
        3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.2.3 歐芹候選內(nèi)參基因Cq值分析
        3.2.4 內(nèi)參基因在不同實(shí)驗(yàn)條件下的表達(dá)變化
        3.2.5 內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性評價(jià)
    3.3 歐芹候選內(nèi)參基因的驗(yàn)證
    3.4 討論
        3.4.1 評價(jià)歐芹內(nèi)參基因表達(dá)的重要性
        3.4.2 內(nèi)參基因表達(dá)穩(wěn)定性評價(jià)
總結(jié)與展望
創(chuàng)新之處
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]顛茄qPCR內(nèi)參基因篩選及TRⅡ基因表達(dá)分析[D]. 李金弟.西南大學(xué) 2013
[2]GA3、6-BA和2，4-D在黃瓜種衣劑中的應(yīng)用效應(yīng)[D]. 楊文清.浙江大學(xué) 2006



本文編號：3729347