葡萄風(fēng)信子（Muscari spp.）是一種多年生單子葉球根觀賞植物,花色以不同程度的藍(lán)色為主、還有粉色、白色品種,因其具備簡單的花色遺傳背景,是研究單子葉植物花色育種的好材料。課題組前期研究表明葡萄風(fēng)信子花色形成主要與類黃酮化合物有關(guān),并提出假說:黃酮醇合成酶（Ma FLS）通過與二氫黃酮醇-4-還原酶（Ma DFR）競爭同一底物二氫黃酮醇從而通向黃酮醇和花青素兩個(gè)支路,二者共同參與調(diào)控藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子花色的形成。目前對藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子花色相關(guān)的關(guān)鍵基因的克隆及功能驗(yàn)證已有研究,但在轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面如何調(diào)控花色形成機(jī)理尚不明確。本研究以藍(lán)色葡萄風(fēng)信子‘黑眼睛’（M.aucheri‘Dark Eyes’）和白色葡萄風(fēng)信子‘白麗人’（M.aucheri‘White Beauty’）為材料,針對黃酮醇支路上重要催化劑FLS基因及其啟動(dòng)子進(jìn)行克隆及功能研究,主要取得以下研究結(jié)果:1.從葡萄風(fēng)信子‘黑眼睛’中克隆得到一條新的FLS基因,命名為Ma FLS1。Ma FLS1基因編碼區(qū)全長999 bp,編碼332個(gè)氨基酸,登錄號MT198683,蛋白分子量為36.96k Da,不穩(wěn)定系數(shù)為40.68,... 

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 葡萄風(fēng)信子研究概述
    1.2 植物啟動(dòng)子研究概述
        1.2.1 植物啟動(dòng)子的分類
        1.2.2 植物啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)
    1.3 植物啟動(dòng)子的克隆方法介紹
        1.3.1 利用啟動(dòng)子探針質(zhì)粒載體篩選啟動(dòng)子
        1.3.2 PCR技術(shù)克隆啟動(dòng)子
    1.4 植物啟動(dòng)子的功能研究方法
        1.4.1 啟動(dòng)子生物信息學(xué)分析
        1.4.2 啟動(dòng)子關(guān)鍵元件鑒定
        1.4.3 啟動(dòng)子功能分析
    1.5 黃酮醇研究概述
        1.5.1 類黃酮及黃酮醇代謝途徑
        1.5.2 黃酮醇合成酶(FLS)基因研究進(jìn)展
        1.5.3 FLS基因啟動(dòng)子研究進(jìn)展
    1.6 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草轉(zhuǎn)化研究概述
        1.6.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化煙草
        1.6.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化煙草
    1.7 本研究的目的意義
    1.8 本研究主要內(nèi)容及技術(shù)路線
        1.8.1 本研究主要內(nèi)容
        1.8.2 本研究技術(shù)路線
第二章 葡萄風(fēng)信子MaFLS基因的克隆及基本功能分析
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 植物實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 克隆菌株及載體
        2.1.5 序列分析所用軟件和網(wǎng)站
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2.2 葡萄風(fēng)信子總RNA的提取
        2.2.3 反轉(zhuǎn)錄First-Strand c DNA的合成
        2.2.4 葡萄風(fēng)信子MaFLS1基因的克隆
        2.2.5 葡萄風(fēng)信子MaFLS1基因克隆載體的構(gòu)建
        2.2.6 葡萄風(fēng)信子MaFLS1基因生物信息學(xué)分析
        2.2.7 葡萄風(fēng)信子MaFLS1基因時(shí)空表達(dá)模式分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 葡萄風(fēng)信子MaFLS1基因的克隆分析
        2.3.2 MaFLS1基因生物信息學(xué)分析
        2.3.3 葡萄風(fēng)信子MaFLS1基因編碼氨基酸同源性分析及聚類分析
        2.3.4 葡萄風(fēng)信子MaFLS1基因表達(dá)分析
    2.4 討論
第三章 MaFLS基因啟動(dòng)子克隆及活性分析
    3.1 材料與試劑
        3.1.1 植物實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 菌株及載體
        3.1.4 生物信息學(xué)分析所用軟件和網(wǎng)站
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 引物合成及測序
        3.2.2 藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子基因組DNA的提取
        3.2.3 藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子MaFLS基因啟動(dòng)子的克隆
        3.2.4 藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子MaFLS基因啟動(dòng)子克隆載體構(gòu)建
        3.2.5 啟動(dòng)子測序及生物信息學(xué)分析
        3.2.6 藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子MaFLS基因啟動(dòng)子及缺失片段瞬時(shí)表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.7 凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)
        3.2.8 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化本氏煙草
        3.2.9 GUS組織化學(xué)染色
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子MaFLS基因啟動(dòng)子的克隆分析
        3.3.2 藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子MaFLS基因啟動(dòng)子生物信息學(xué)分析
        3.3.3 藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子MaFLS基因啟動(dòng)子序列比對分析
        3.3.4 藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子MaFLS基因啟動(dòng)子瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.5 藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子MaFLS基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌鑒定
        3.3.6 藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子MaFLS基因啟動(dòng)子活性分析
    3.4 討論
第四章 MaFLS基因啟動(dòng)子在異源植物煙草中的功能分析
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 植物實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)所用載體
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑和菌株
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 引物設(shè)計(jì)
        4.2.2 p HFLS、p BFLS啟動(dòng)子GUS融合穩(wěn)定轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建
        4.2.3 凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        4.2.4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化
        4.2.5 轉(zhuǎn)基因植株鑒定
        4.2.6 GUS組織化學(xué)染色
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 藍(lán)、白葡萄風(fēng)信子MaFLS基因啟動(dòng)子植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.3.2 植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌鑒定
        4.3.3 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
        4.3.4 GUS組織化學(xué)染色及啟動(dòng)子特異性分析
    4.4 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A 縮略詞
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[3]大豆、小麥抗逆相關(guān)Gm/TaAREB轉(zhuǎn)錄因子基因、啟動(dòng)子克隆及功能鑒定[D]. 高世慶.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2007
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碩士論文
[1]用于棉花抗黃萎病育種的根系特異性啟動(dòng)子的克隆與應(yīng)用[D]. 陳亞東.浙江大學(xué) 2019
[2]苧麻韌皮部特異型啟動(dòng)子發(fā)掘及功能研究[D]. 鄭焱誠.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[3]煙草MYC1a/1b轉(zhuǎn)錄因子在煙堿合成中的功能分析[D]. 李斐.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[4]蘋果MdHB1基因啟動(dòng)子的克隆及特征分析[D]. 王豪杰.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[5]利用酵母單雜交方法對OsHsfB2c啟動(dòng)子結(jié)合蛋白的篩選[D]. 李濯雪.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[6]巴斯德畢赤酵母新啟動(dòng)子PGCW14的調(diào)控結(jié)構(gòu)和應(yīng)用研究[D]. 張軒薇.華南理工大學(xué) 2013



本文編號：3684466