草莓鑲脈病毒（Strawberry vein banding virus,SVBV）中國分離物侵染性克隆pSVBV-SY可以侵染森林草莓,但是葉片劃傷接種侵染率較低,阻礙了侵染性克隆的研究。為了改進接種方法,本研究利用農(nóng)桿菌真空抽濾法接種草莓,可顯著提高接種效率,pSVBV-SY在森林草莓上實現(xiàn)高效侵染且表現(xiàn)出典型鑲脈癥狀。SVBV病毒載體pSVBV-MCS同法接種森林草莓,可驗證其侵染性。已有研究發(fā)現(xiàn)花椰菜花葉病毒科病毒P6蛋白能夠反式激活多順反子mRNA的翻譯,本研究鑒定SVBV P6蛋白是病毒的翻譯反式激活因子（transactivator）,能夠高效激活人工構(gòu)建雙順反子第2個基因的表達。預(yù)測反式激活因子P6功能域,構(gòu)建系列P6突變體,發(fā)現(xiàn)P6各突變體均不能反式激活雙順反子第2個基因的表達。1 SVBV侵染性克隆的侵染性鑒定和檢測比較劃傷接種法和真空抽濾法接種草莓的接種效率,SVBV沈陽分離物侵染性克隆pSVBV-SY接種森林草莓,均接種15株,35d后檢測侵染率,劃傷接種侵染率僅在20%-40%之間,真空抽濾法接種侵染率在86%-100%之間。顯癥植株P(guān)CR均能夠檢測到pSVB... 

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
文獻綜述
    1 草莓鑲脈病毒
        1.1 草莓鑲脈病毒的分類及其主要特性
        1.2 草莓鑲脈病毒基因組結(jié)構(gòu)及其編碼的蛋白及功能
    2 植物病毒侵染性克隆與病毒載體
        2.1 植物病毒侵染性克隆
        2.2 植物病毒載體
        2.3 植物病毒侵染性克隆接種方法
    3 真核細胞基因翻譯再起始
        3.1 真核細胞基因翻譯再起始概述
        3.2 CaMV病毒反式激活因子的研究進展
            3.2.1 反式激活因子簡介
            3.2.2 CaMV反式激活因子TAV,調(diào)控多順反子mRNA的翻譯
            3.2.3 TAV與寄主體內(nèi)翻譯因子的互作研究
引言
材料與方法
    1 材料
        1.1 植物材料
        1.2 菌株、質(zhì)粒和載體
        1.3 酶和常用試劑
        1.4 常用緩沖溶液
        1.5 常用實驗儀器
    2 方法
        2.1 草莓葉片總DNA的提取
            2.1.1 CTAB抽提液配制
            2.1.2 CTAB法提取草莓葉片總DNA操作步驟
        2.2 總RNA的提取
        2.3 PCR技術(shù)
            2.3.1 Taq酶反應(yīng)體系配制
            2.3.2 Taq酶反應(yīng)程序設(shè)置
        2.4 基因的克隆步驟
            2.4.1 高保真酶PCR擴增
            2.4.2 高保真酶PCR擴增反應(yīng)程序設(shè)置
            2.4.3 PCR產(chǎn)物生成粘性末端
            2.4.4 DNA產(chǎn)物的連接
            2.4.5 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備
            2.4.6 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞的制備
            2.4.7 質(zhì)粒提取
        2.5 農(nóng)桿菌接種
            2.5.1 農(nóng)桿菌浸潤本氏煙
            2.5.2 SVBV侵染性克隆接種森林草莓
        2.6 雙順反子的克隆構(gòu)建
            2.6.1 引物設(shè)計
            2.6.2 雙順反子的克隆
        2.7 植物蛋白提取
結(jié)果與分析
    1 SVBV侵染性克隆的侵染性鑒定和檢測
        1.1 SVBV侵染性克隆真空抽濾法接種草莓
        1.2 SVBV沈陽分離物侵染性克隆具有侵染性
        1.3 SVBV沈陽分離物侵染性克隆接種森林草莓的檢測
    2 SVBV病毒載體的侵染性鑒定
        2.1 SVBV病毒載體具有侵染性
    3 SVBV病毒侵染性克隆能夠反式激活雙順反子表達
        3.1 SVBV病毒侵染性克隆能夠反式激活CaMV雙順反子表達
    4 SVBV病毒反式激活因子的鑒定
        4.1 除P6外病毒其他各ORF蛋白均不能反式激活雙順反子表達
        4.2 P6蛋白能夠反式激活不同病毒來源雙順反子表達
    5 P6蛋白反式激活功能域的探究
        5.1 P6蛋白各個突變體均不能反式激活雙順反子表達
討論
    1 SVBV病毒侵染性克隆的接種方法
    2 SVBV病毒載體的構(gòu)建
    3 P6反式激活功能域的研究
    4 P6對反式激活翻譯過程的調(diào)控機制
結(jié)論
參考文獻
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]草莓病毒病研究進展[J]. 周厚成,何水濤.  果樹學(xué)報. 2003(05)
[4]正鏈RNA病毒基因組感染性克隆研究進展[J]. 吳海祥,張楚瑜.  武漢大學(xué)學(xué)報(理學(xué)版). 2002(04)
[5]乙型肝炎病毒蛋白反式激活基因的研究[J]. 劉妍,成軍,陸蔭英,李克.  世界華人消化雜志. 2002(02)
[6]草莓病毒種類鑒定及培育無病毒種苗的技術(shù)研究[J]. 王國平,劉福昌,薛光榮,朱秋英,楊振英,王煥玉.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 1990(04)

碩士論文
[1]草莓鑲脈病毒抑制沉默機制及其中國分離物侵染性鑒定[D]. 張漢平.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號：3646186