近些年來葡萄（Vitis vinifera L）果實中的有機酸含量因全球氣候變暖而嚴重不足,果實的著色和風味受到不利影響,釀造的葡萄酒品質和口感欠佳,嚴重影響了葡萄酒產業(yè)的發(fā)展和經濟效益。葡萄果實的有機酸中蘋果酸含量較高,能被高效代謝,受外界環(huán)境因素的影響較大,研究釀酒葡萄蘋果酸的合成與代謝、相關基因的表達調控顯得尤為重要。本研究首先以寧夏地區(qū)栽培面積最大的釀酒葡萄品種赤霞珠（Cabernet Sauvignon）為材料,從果實形成至成熟4個發(fā)育時期的果實中提取RNA進行轉錄組測序,同時對同一時期的果實中與蘋果酸關系比較密切的8種有機酸含量進行測定,篩選出影響赤霞珠果實中蘋果酸生物合成的關鍵酶類及其基因,并對其進行分離克隆、原核細胞表達和體外酶活性檢測;然后選擇3個葡萄栽培基地的赤霞珠為材料,從4個發(fā)育時期的果實中提取RNA,對這些關鍵基因進行實時熒光定量PCR（qPCR）驗證,并與同時期果實的有機酸含量進行顯著性差異檢驗和相關性分析,進一步研究這些關鍵基因在葡萄不同栽培地區(qū)、果實不同發(fā)育時期,對蘋果酸等有機酸生物合成與代謝的綜合影響和調控機制。該研究為今后培育優(yōu)質釀酒葡萄奠定了分子基... 

【文章來源】：寧夏大學寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－３赤霞珠果實４個發(fā)育時期有機酸含量變化??注：數據為平均值±標準誤，《＝３．??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｏｒｇａｎ?

Ｓｔａｇｅ?Ｓｔａｇｅ??圖２－３赤霞珠果實４個發(fā)育時期有機酸含量變化??注：數據為平均值±標準誤，《＝３．??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３?Ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｏｒｇａｎｉｃ?ａｃｉｄｓ?ｃｏｎｔｅｎｔｓ?ａｔ?４?ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ?ｓｔａｇｅｓ?ｏｆ?Ｃａｂｅｒｎｅｔ?Ｓａｕｖｉｇｎｏｎ?ｆｒｕｉｔｓ??Ｎｏｔｅ?Ｄａｔａ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｍｅａｎｓ?士?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｅｒｒｏｒ．?？＝３．??２．２．４赤霞珠果實蘋果酸生物合成關鍵基因的篩選??根據轉錄組二代測序結果，利用這８種相關酶類的功能基因及其同源基因在硬果期、綠果??期、轉色期以及成熟期４個時期的基因表達量ＦＰＫＭ與同一樣本的８種有機酸含量進行加權基??因共表達網絡ＷＧＣＮＡ關聯(lián)分析（圖２－４）、韋恩差異基因表達分析篩選出與有機酸含量變化具??有較高相關性（ｒ＞±０．５）的基因為候選的關鍵基因（表２－４），進行下一步的基因克隆和功能驗??證：其中，ＰＫ催化磷酸烯醇式丙酮酸生成丙酮酸，其同源基因中基因表達量與磷酸烯醇式丙??酮酸、丙酮酸含量呈較高正相關關系的有６個，而與丙酮酸含量呈較高負相關關系的有４個，??選取?ＶＩＴ＿０８ｓ０００７ｇ０４１７０、ＶＩＴ＿１６ｓ００５０ｇ０２６６０?基因（ＣｓＰＡ７，?ＣｖＰＡ：２）；?ＰＤＨ?催化丙酮酸生成??乙酰輔酶Ａ，其同源基因中基因表達量與丙酮酸含量呈較高正負相關關系的各有５個，選取??ＶＩＴ＿０１ｓ００２６ｇ００９９０、ＶＩＴ＿ｌｌｓ００１６ｇ０１８７０?基因ＰＥＰＣ?催化磷酸烯醇式丙??酮酸生成草酰乙酸

寧夏大學碩士學位論文?第三章赤霞珠果實蘋果酸生物合成關鍵基因的克隆和酶活性檢３．１．３赤霞珠蘋果酸生物合成關鍵基因的原核表達載體構建??３．１．３．１帶有ｐＴｒｃ－ＣＫＳ載體相應末端序列的目的基因擴增??設計帶有原核表達載體ｐＴｒｃ－ＣＫＳ限制性內切酶５ａ／ｗ／／?Ｉ和￡ｃｏ／？?Ｉ相應末端序列的引物，??以上一節(jié)克隆到ＴＡ載體攜帶目的基因的ｐＭＤ１８－Ｔ?Ｓｉｍｐｌｅ?Ｖｅｃｔｏｒ為模板，擴增１６個關鍵基（表?３－５）。??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]氣候變化對賀蘭山東麓釀酒葡萄的影響及應對措施[J]. 李玉鼎,張光弟,李欣,馮彥彪,尹清雨.  中外葡萄與葡萄酒. 2019(01)
[2]植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究進展[J]. 王麗媛,張玉,徐明怡,冷海楠,伍一寧.  國土與自然資源研究. 2017(05)
[3]全球氣候變暖對葡萄和葡萄酒品質的影響[J]. 劉敏,閔卓,鞠延侖,趙現方,房玉林.  北方園藝. 2017(04)
[4]賀蘭山東麓釀酒葡萄中有機酸含量分析[J]. 楊春霞,劉元柏,葛謙.  食品科技. 2016(11)
[5]植物功能基因單核苷酸多態(tài)性的研究進展[J]. 張志鵬,王曉玥,黃少雄,張昭.  中國農學通報. 2016(20)
[6]不同產地釀酒葡萄“赤霞珠”果實中有機酸差異性研究[J]. 趙悅,韓寧,孫玉霞,孫慶揚,韓愛芹,趙新節(jié).  食品工業(yè)科技. 2016(01)
[7]果實有機酸代謝研究進展[J]. 周先艷,朱春華,李進學,高俊燕,龔琪,沈正松,岳建強.  中國南方果樹. 2015(01)
[8]L-蘋果酸生物合成研究進展[J]. 吳軍林,吳清平,張菊梅,張文,莫樹平,柏建玲.  食品科學. 2014(03)
[9]不同品種釀酒葡萄有機酸含量分析[J]. 成冰,張京芳,徐洪宇,侯力璇,王月暉,張顏,王成.  食品科學. 2013(12)
[10]HPLC法測定賀蘭山東麓釀酒葡萄中蘋果酸含量[J]. 羅陽,賀曉光,楊軍,楊波.  安徽農業(yè)科學. 2011(33)

博士論文
[1]鮮食葡萄果實糖酸組分遺傳及葡萄糖苷酶基因的表達研究[D]. 張國軍.中國農業(yè)大學 2013

碩士論文
[1]河北昌黎5個釀酒葡萄品種比較研究[D]. 陳海菊.西北農林科技大學 2010



本文編號：3602475