香菇多糖在香菇菌絲和子實體中含量很低,導致工業(yè)生產(chǎn)產(chǎn)量低成本高,難以滿足市場需求,因此應用遺傳育種手段選育香菇多糖高產(chǎn)菌株十分必要。本實驗采用啟動子替代技術構建香菇多糖高產(chǎn)工程菌,應用平菇gpd啟動子替代香菇葡聚糖合成酶基因gls的啟動子,提高葡聚糖合成酶基因的表達,提高香菇多糖產(chǎn)量。結果如下:（1）從PAN7-1質粒克隆得到潮霉素抗性基因表達盒D2（3321 bp）,從香菇L26基因組中克隆得到gls基因啟動子上游序列（上游同源臂）D1（870 bp）、gls基因起始密碼子下游序列（下游同源臂）D4（867 bp）,從平菇新831基因組中克隆得到gpd啟動子D3（950 bp）。用融合PCR把上游同源臂與潮霉素抗性基因表達盒融合在一起,連到PMD19-T載體得到PMDF19-T質粒。用融合PCR把gpd啟動子與下游同源臂融合在一起,連到pEASY-BluntE1載體上得到PEASY-Blunt-F質粒。對兩個構建好的質粒分別設計酶切位點,用AscI與PacI雙酶切PMDF19-T質粒,得到D1和D2的融合片段（4191 bp）,用PacI酶切PEASY-Blunt-F質粒使之線性化,... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學河南省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質粒Lhg-R的構建Fig.2-1TheconstractionoftheplasmidLhg-R

A BC D圖 2-2：同源重組片段的 PCR 產(chǎn)物電泳檢測圖kb pLus DNA Ladder A；1：左臂 870bp；B；1：潮霉素抗性基因 3321bp2: ELectrophoresis pLot of PCR product of homoLogous recombination fragment.pLus DNA Ladder A; 1: Left arm 870bp; B; 1: hygromycin resistant gene 3321bp.

L26 下游同源臂擴增結果如圖 2-2，2-3 所示。成功克隆出所需的目的基因以用于后續(xù)實驗。abA B圖 2-2：同源重組片段的 PCR 產(chǎn)物電泳檢測圖:1kb pLus DNA Ladder A；1：左臂 870bp；B；1：潮霉素抗性基因 3321bp2-2: ELectrophoresis pLot of PCR product of homoLogous recombination fragment.b pLus DNA Ladder A; 1: Left arm 870bp; B; 1: hygromycin resistant gene 3321bp.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]農(nóng)桿菌介導香菇菌絲遺傳轉化體系的研究[J]. 姜寧,宋春艷,劉建雨,譚琦,章爐軍,尚曉冬.  菌物學報. 2017(11)
[2]啟動子替代構建糙皮側耳漆酶高產(chǎn)菌株[J]. 劉冬忍,田芳,王小飛,王景冒,戚元成,宋安東,申進文,邱立友.  菌物學報. 2016(05)
[3]轉座子中關于轉座機制及相關技術的探究[J]. 尹洋.  赤峰學院學報(自然科學版). 2015(18)
[4]超微粉碎對香菇多酚組成及抗氧化活性的影響[J]. 張小利,夏春燕,王慧清,明建.  食品科學. 2015(11)
[5]兩步融合PCR法構建煙曲霉ssk1基因敲除株[J]. 馬彥,岑雯,劉昕,馮文莉.  山西醫(yī)科大學學報. 2014(04)
[6]香菇多糖提取方法的研究[J]. 石來寶,陳靜,殷霞.  藥學研究. 2014(04)
[7]不同烘干方法對香菇干燥品質的影響[J]. 金昌福.  延邊大學農(nóng)學學報. 2013(04)
[8]根癌農(nóng)桿菌介導雙價載體pPK2轉化黑曲霉條件的研究[J]. 王艷,王文雅,袁其朋.  食品科技. 2013(08)
[9]香菇多糖對幼建鯉腸道菌群數(shù)量及非特異性免疫指標的影響[J]. 黃小麗,鄧永強,汪開毓,杜宗君,耿毅,陳德芳.  大連海洋大學學報. 2013(04)
[10]長片段融合PCR在構建煙曲霉rho1基因回補株中的應用[J]. 韓改革,賈曉東,韓雪琳,趙帥,韓黎.  中國真菌學雜志. 2013(03)

博士論文
[1]根癌農(nóng)桿菌介導的靈芝遺傳轉化體系的建立及其在靈芝三萜生物合成研究中的應用[D]. 師亮.南京農(nóng)業(yè)大學 2012

碩士論文
[1]香菇罐藏類食品的研制及HACCP在其加工中的應用[D]. 席甜.山西農(nóng)業(yè)大學 2013
[2]真菌強啟動子活性片段的克隆及轉基因載體的構建[D]. 何瑩瑩.浙江農(nóng)林大學 2013
[3]VDHl和GPCR基因在大麗輪枝菌微菌核發(fā)育過程中的功能研究[D]. 陳婷.西北農(nóng)林科技大學 2013
[4]平菇NADPH氧化酶基因noxA的克隆及其功能的研究[D]. 李銀鳳.河南農(nóng)業(yè)大學 2011
[5]阿魏化學成分對阿魏側耳菌絲生長及蛋白質表達的研究[D]. 白羽嘉.新疆農(nóng)業(yè)大學 2010
[6]根癌農(nóng)桿菌介導哈茨木霉遺傳轉化體系優(yōu)化及突變體篩選[D]. 葉小波.云南農(nóng)業(yè)大學 2009
[7]華山新麥草附加系抗條銹病基因的遺傳作圖和小麥條銹菌毒性突變體的研究[D]. 張亮.西北農(nóng)林科技大學 2009
[8]香菇農(nóng)桿菌介導轉化條件優(yōu)化及BCA基因轉化研究[D]. 喻義贛.福建農(nóng)林大學 2009



本文編號：3122387