湖南是重要的辣椒產(chǎn)地,隨著辣椒貿(mào)易的擴大和各地種子的頻繁調(diào)運,辣椒病毒病危害日趨嚴(yán)重,影響了辣椒的產(chǎn)量和品質(zhì)。辣椒病毒病的病毒種類很多,但地區(qū)間存在差異,掌握各地區(qū)病毒主要種類,建立快速、準(zhǔn)確、靈敏的病毒檢測方法對辣椒病毒病的防治具有重要的意義。本研究對采自湖南各地辣椒樣本通過siRNAs測序與RT-PCR檢測驗證發(fā)現(xiàn)湖南辣椒病毒毒原種類有煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus, TMV）、黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus, CMV）、馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）、蠶豆萎蔫病毒2號（Broad bean wilt virus 2, BBWV 2）、辣椒輕斑駁病毒（Pepper mild mottle virus, PMMoV）和辣椒葉脈斑駁病毒（Chilli veinal mottle virus, ChiVMV）、辣椒葉脈黃化病毒（Pepper vein yellows virus, PeVVV）、辣椒環(huán)斑病毒（Chilli ringspot virus, ChiRSV）和煙草輕型綠花葉病毒（Tobacco mild g... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 辣椒病毒病毒原種類
        1.1.1 煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）
        1.1.2 黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）
        1.1.3 馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）
        1.1.4 蠶豆萎蔫病毒2號（Broad bean wilt virus,BBWV2）
        1.1.5 辣椒葉脈斑駁病毒（Chilli veinal mottle virus,ChiVMV）
        1.1.6 辣椒輕斑駁病毒（Pepper mild mottle virus,PMMoV）
        1.1.7 辣椒葉脈黃化病毒（Pepper vein yellows virus,PeVYV）
        1.1.8 辣椒環(huán)斑病毒（Chilli ringspot virus,ChiRSV）
        1.1.9 煙草輕型綠花葉病毒（Tobacco mild green mosaic virus,TMGMV）
    1.2 siRNA深度測序技術(shù)
    1.3 全基因組克隆
        1.3.1 病毒基因組克隆策略
        1.3.2 病毒基因組3’端克隆
        1.3.3 病毒基因組5’端克隆
    1.4 辣椒病毒病檢測技術(shù)研究進展
        1.4.1 常規(guī)植物病毒檢測方法
        1.4.2 血清學(xué)檢測法
        1.4.3 分子生物學(xué)方法
    1.5 本項目研究的目的與意義
第二章 湖南辣椒毒原種類鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 樣本采集
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 檢測引物
    2.2 方法
        2.2.1 總RNA的提取及cDNA的合成
        2.2.2 病毒種類的RT-PCR驗證
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 PCR驗證siRNA測序存在的病毒
        2.3.2 2013年辣椒病毒病原檢測結(jié)果
    2.4 討論
第三章 ChiVMV和PMMoV湖南分離物的序列分析
    3.1 材料
    3.2 方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 辣椒葉脈斑駁病毒（ChiVMV）湖南分離物的結(jié)果與分析
        3.3.2 辣椒輕斑駁病毒（PMMoV）湖南分離物的結(jié)果分析
    3.4 討論
第四章 四種病毒的多重PCR
    4.1 材料
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 病毒和植物材料
    4.2 四種侵染辣椒病毒毒原的多重RT-PCR檢測
        4.2.1 核酸提取與反轉(zhuǎn)錄
        4.2.2 引物設(shè)計與測序
        4.2.3 多重RT-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化
    4.3 實驗結(jié)果與分析
        4.3.1 病毒引物和RT-PCR擴增產(chǎn)物的測序結(jié)果
        4.3.2 單重P-PCR退火溫度結(jié)果和優(yōu)化后多重RT-PCR的反應(yīng)體系
        4.3.3 多重RT-PCR靈敏度實驗結(jié)果
        4.3.4 多重RT-PCR的適用性試驗結(jié)果
    4.4 討論
第五章 總結(jié)與討論
參考文獻
附錄 本實驗所用重要縮寫及中文對照
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]一種辣椒輕斑駁病毒和辣椒斑駁病毒復(fù)合侵染的線椒病毒病害分子鑒定[J]. 魯宇文,彭杰軍,鄭紅英,林林,燕飛,陳劍平.  科技通報. 2015(09)
[2]江蘇省葫蘆科作物6種病毒的多重RT-PCR方法及應(yīng)用[J]. 任春梅,程兆榜,楊柳,繆倩,周益軍.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2015(04)
[3]辣椒輕斑駁病毒的分子雜交檢測[J]. 劉崇,高穎,楊洪一.  湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2015(04)
[4]貴州辣椒病毒病的種類檢測[J]. 王莉爽,陳文,譚清群,陳小均,吳石平,何海永,楊學(xué)輝.  貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(08)
[5]辣椒病毒病研究進展[J]. 汪沛,湯琳菲,雷艷,熊興耀,聶先舟,胡新喜.  湖南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(07)
[6]重慶辣椒病毒病病原初步鑒定和分析[J]. 郭思瑤,童艷,黃婭,羅信福,青玲.  園藝學(xué)報. 2015(02)
[7]辣椒輕斑駁病毒（PMMoV）新疆加工型辣椒分離物的鑒定和致病型分析[J]. 張強,張春竹,李克梅,羅明,楚金平.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2014(25)
[8]辣椒的生產(chǎn)現(xiàn)狀及發(fā)展[J]. 王文霞.  北京農(nóng)業(yè). 2014(18)
[9]檢測三種煙草病毒的一步法多重RT-PCR[J]. 張俊祺,楊軍,宋紀(jì)真,羅朝鵬,王燃,李鋒,周小龍.  煙草科技. 2014(02)
[10]一步RT-PCR檢測水仙黃條病毒[J]. 沈建國,高芳鑾,林雙慶,李敏,于文濤,虞赟,蔡偉.  生物技術(shù). 2014(01)

博士論文
[1]辣椒病毒病研究[D]. 張竹青.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]辣椒環(huán)斑病毒（Chilli ringspot virus）全基因組克隆及序列分析[D]. 龔殿.海南大學(xué) 2012
[2]利用多重PCR一次檢測侵染大豆的幾種檢疫性病毒及大豆內(nèi)源基因的研究[D]. 易汪雪.上海海洋大學(xué) 2011



本文編號：3122021