發(fā)布時間：2021-01-21 07:54

　　海藻糖是廣泛存在于生物中的一種非還原性二糖,其理化性質穩(wěn)定,在各物種中均有增強脅迫耐受性的報道。高溫脅迫是糙皮側耳農業(yè)式栽培不可避免的環(huán)境因素,研究熱脅迫下糙皮側耳的海藻糖代謝對于農業(yè)生產具有深遠的意義。本研究包括以下四個方面:（1）將糙皮側耳 6-磷酸海藻糖合成酶（Trehalose-6-phosphate synthase from Pleurotusostreatus,PoTPS1）基因原核表達,并檢測純化后蛋白的酶動力學參數,得到PoTPS1蛋白的酶動力學參數如下:Km（G6P）為 0.14 mM,Km（UDPG）為 0.17 mM,Kca為 5.89 s-1 Vmax 為 91.86 nKat.g-1;其次,該酶的最適反應溫度為30℃,最適反應pH為7.4;另外,對熱脅迫下糙皮側耳胞內海藻糖含量的檢測發(fā)現,40℃熱處理15 h后海藻糖的積累最高,為158.88 mg.g-1干菌絲,此時PoTPS1酶活最高,海藻糖降解酶酶活最低,進一步驗證了糙皮側耳中TPS-TPP海藻糖合成途徑。（2）在糙皮側耳中構建了農桿菌介導的遺傳轉化（Agrobacterium tumies-media... 

【文章來源】：中國農業(yè)大學北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：112 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－２植物中溫度信號的傳遞??溫度脅迫下，胞質鈣離子含量升高或使得細胞面臨脫水壓力，這些脅迫信號通過各自的信號轉導途徑誘導??下游基因的表達

的生理學意義并沒有詳細的證實，然而可以推測，生長的停滯可能是為了使細胞有足夠的時間??修復脅迫后損傷的蛋白，恢復胞內代謝的平衡。??熱脅迫對釀酒酵母代謝調控的影響如圖１－３所示：??細胞代謝的重新統(tǒng)籌：熱脅迫會影響酵母細胞內碳代謝的重新分配。熱脅迫下，釀酒酵母??胞內會出現海藻糖的大量積累，：ＴＰＳ／和基因缺陷的菌株由于不能合成海藻糖，菌體的熱耐??受性顯著下降；而Ｍ７／基因的缺陷導致胞內海藻糖的積累，從而使菌株具備對于熱脅迫的抗性??（ＥＩｅｕｔｈｅｒｉｏｅｔａｌ．，１９９３）；然而，當解除熱脅迫對菌體的影響后，ＡＴＴ／基因在海藻糖降解中發(fā)揮的??作用對其脅迫后的恢復生長起著關鍵的作用（Ｎｗａｋａｅｔａｌ．，?１９９５）。以上結果表明，熱脅迫下碳湄??的重新分配與菌體對脅迫的耐受性密切相關。進一步的研究表明，碳源流向海藻糖之所以能影??響菌株對脅迫的耐受性是由于海藻糖分子發(fā)揮了類似分子伴侶的作用，作為一種特殊的抗脫水??劑

第一章緒論??ｅｔａｌ．，１９９６）。因此，酵母細胞對Ｈ２〇２的響應也導致了對熱脅迫的耐受性，具體的響應途徑除了??圖１－３所示外，還包括對Ｈ２０２的響應（圖１－４）。??Ｈ２０２調控胞質硫氧還蛋白由還原態(tài)Ｔｒｘｒｅｄ轉化為氧化態(tài)ＴｒＸ°ｘ，胞質硫氧還蛋白氧化狀態(tài)的??改變促使Ｍｓｎ２進入細胞核，結合到ＳＴＲＥ?（Ｓｔｒｅｓｓ?ｒｅｓｐｏｎｓｅ?ｅｌｅｍｅｎｔ）的同源結合位點上，激活目??標基因的轉錄。Ｈｓｆｌ受營養(yǎng)相關的轉錄因子Ｓｎｆｌ和ＰＫＡ及氧化脅迫的調控，結合到ＨＳＥ（Ｈｅａｔ??ｓｈｏｃｋ?ｅｌｅｍｅｎｔｓ）的啟動子區(qū)域，調控相關基因的轉錄，通過以上途徑調控釀酒酵母對相應脅迫??的抗性（圖１－４）。??Ｉ??Ｔｒｘ－?—Ｔｒｘ＊?Ｓｎｆ１?ＰＫＡ?—Ｊ?Ｙａｋ１??Ｍｓｎ２／４?ｐｐ｜??／?．?ｘ?ｃｙｔｏｐｌａｓｍ??Ｍｓｎ５?｜??１?ｎｕｃｌｅｕｓ??、Ｍｓｎ２Ｍ?丄?ｖ?”??Ａ?Ｈｓｆ１???????＾—Ｌ?ＨＳＥ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ｇｅｎｅｓ??”???ｔ???ｃｃｃ－ｃ〒?Ｌ?ＳＴＲＥ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ｇｅｎｅｓ?？??Ｈ＾２０２．??圖１－４氧化脅迫下．釀酒酵母對Ｍｓｎ２／４和Ｈｓｆｌ的調控??該圖展示了生長調控蛋白和氧化脅迫對Ｍｓｎ２表達的調控。過氧化氫誘導胞質硫氧還蛋白由還原態(tài)ＣＩＹｘ＃）??向氧化態(tài)（Ｔｒｘ°ｘ）的轉變，從而誘導了?Ｍｓｎ２進入核內，并結合到同源結合位點（應激反應元素，ＳＴＲＥ），最終激??活目標基因的表達。Ｈｓｆｌ定位于細胞核，并預先結合于有熱激因子（ＨＳＥｓ）的目標基因啟動子區(qū)域。氧化脅迫??下

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2990779